上調(diào)細(xì)胞間縫隙連接通訊以促進(jìn)膠質(zhì)瘤HSV-tk基因治療療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院博士學(xué)位論文上調(diào)細(xì)胞間縫隙連接通訊以促進(jìn)膠質(zhì)瘤HSVtk基因治療療效的實(shí)驗(yàn)研究姓名：張雪峰申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)外科學(xué)指導(dǎo)教師：任祖淵方福德2002.4.1中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文示，C6一Cx43和C6tkCx43細(xì)胞的Cx43mRNA水平較野生型C6細(xì)胞明顯的增商。／通過細(xì)胞生長曲線的測繪和計(jì)算細(xì)胞倍增時(shí)間，Cx43基因?qū)6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長L抑制作用也得以顯現(xiàn)，而HSV—tk基因?qū)6細(xì)胞的

2、生長無明顯影H眥在體外旁觀者效應(yīng)實(shí)驗(yàn)。，首先采ffJ在無GCV培養(yǎng)基內(nèi)生長的C6／C6tk混合細(xì)胞作為對照，分別計(jì)算經(jīng)GCV治療后C6／C6tk混合細(xì)胞及C6Cx43／C6tk—Cx43混合細(xì)胞的生存率，在同比例混合細(xì)胞，Cx43轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的存活率明顯低于Cx43未轉(zhuǎn)染組，說明Cx43轉(zhuǎn)染明顯增強(qiáng)了膠質(zhì)瘤HSV—tk基因治療的療效。考慮到Cx43基因?qū)δz質(zhì)瘤細(xì)胞的生長抑制作用，實(shí)驗(yàn)中進(jìn)一步采用了同類混合細(xì)胞作為自身對照以消除Cx43生長

3、抑制作用的影響，顯示Cx43基因通過促進(jìn)GJIC對旁觀者效應(yīng)的增強(qiáng)作用。同樣，Cx43轉(zhuǎn)染組的旁觀者效應(yīng)也明顯強(qiáng)于未轉(zhuǎn)染組。C6／C6tk和C6一Cx43，C6tkCx43細(xì)胞以不同比例混合后，分別接種于大鼠皮下，進(jìn)行體內(nèi)旁觀者效應(yīng)實(shí)驗(yàn)。在Cx43未轉(zhuǎn)染組，50％的C6tk細(xì)胞才可以使腫瘤完全消失，而在Cx43轉(zhuǎn)染組，25％的C6tk—Cx43細(xì)胞就能夠達(dá)到上述目的。在各比例混合細(xì)胞接種位點(diǎn)(包括100％HSV—tk陰性細(xì)胞接種位點(diǎn))，

4、Cx43轉(zhuǎn)染組的腫瘤也都明顯小于Cx43未轉(zhuǎn)染組相應(yīng)的腫瘤。以各組100％HSVtk陰性細(xì)胞接種位點(diǎn)的腫瘤作為參照，計(jì)算其他各位點(diǎn)腫瘤相對大小的結(jié)、／果也說明，Cx43基因在體內(nèi)也可以明顯增強(qiáng)旁觀者效應(yīng)。，上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果一方面有力的證明了GJIC在旁觀者效應(yīng)中的重要地位，同時(shí)也為膠質(zhì)瘤聯(lián)合基因治療提供了一個(gè)新的策略。膽是該方法存在著臨床實(shí)用性方面的不足，因?yàn)樵诂F(xiàn)有載體條件下，使所有腫瘤細(xì)胞表達(dá)外源性Cx43基因同樣是難以實(shí)現(xiàn)的。從實(shí)用性角

5、度出發(fā)，本研究選用apigenin(AP)和全反式維甲酸(ATRA)上調(diào)C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的GJIC，以達(dá)到同樣的治療目的。經(jīng)10pMAP或1pM、10pM、100MM的ATRA分別作用后，C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞的GJIC顯著增強(qiáng)，半定量Cx43RT—PCR也顯示了AP對C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞Cx43基因轉(zhuǎn)錄的明顯上調(diào)作用，而ATRA對Cx43的表達(dá)在RNA水平不產(chǎn)生明顯影響。經(jīng)不同濃度的ATRA作用后，在C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞可以觀察到細(xì)胞分化的形態(tài)學(xué)特征。細(xì)胞