家蠶V-ATPase B亞基和6PGL基因的研究.pdf

1、蠶是重要的經(jīng)濟昆蟲，蠶絲業(yè)是我國擁有5000多年悠久歷史的傳統(tǒng)產(chǎn)業(yè)，從古至今在社會經(jīng)濟文化生活中占有重要地位，同時家蠶也是鱗翅目的模式昆蟲。家蠶功能基因組學(xué)的研究將為全面、準確的了解家蠶生物性狀的遺傳基礎(chǔ)和分子調(diào)控機制，為改善蠶絲產(chǎn)業(yè)提供了理論基礎(chǔ)和技術(shù)支持，也為解明基礎(chǔ)生物學(xué)現(xiàn)象提供了基礎(chǔ)。 本論文課題通過利用實驗和生物信息學(xué)相結(jié)合的方法克隆得到了家蠶二個新基因，并對這些基因做了初步的結(jié)構(gòu)和功能分析。主要研究結(jié)論如下：

2、 (1)利用電子克隆方法得到了家蠶V-ATPase的B亞基，該基因在多種生物體中都非常保守。RT-PCR結(jié)果顯示該基因在各組織中都有表達。對家蠶抗性品系NB和感性品系306接種BmNPV病毒后，分別在24h，48h和72h提取家蠶中腸RNA，并利用熒光定量PCR(qPCR)分析果表明：感染后24h該基因在抗性品系中比感性品系中表達水平高，這可能跟V-ATPase參與抗BmNPV有關(guān)。在感染后48h和72h，V-ATPase的表達水平降低

3、到一個很低水平。 利用pET-30表達系統(tǒng)，在大腸桿菌中表達了該基因，得到了分子量約60kD的融合蛋白，制備了抗血清。對家蠶中腸的免疫組化結(jié)果顯示，V-ATPase主要定位在中腸杯狀細胞的頂端質(zhì)膜，以及頂端質(zhì)膜形成的空洞周圍。 (2)利用電子克隆方法得到了家蠶6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯酶(6-Phosphogluconolactonase，6PGL)基因。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明：該基因含有四個外顯子和三個內(nèi)含子，開放閱讀框(O