家蠶DGCR6基因原核表達和蛋白純化.pdf

1、浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文家蠶DGCR6基因原核表達和蛋白純化姓名：朱安平申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：張耀洲20090501浙江理工大學(xué)碩士學(xué)位論文A b s t r a c tB o m b y x m o r ii s a l li m p o r t a n te c o n o m i ci n s e c t ，w h i c hc a n b r i n gh u g ee c o n o m i c

2、b e n e f i t s ．A l s o ，B o m b y x m o r ii s a p r o p e rm o d e l i n t h eb i o l o g i c a l f i e l d s ，d e s e r v i n gd e e p e rs t u d y ．T h e g e n ea b o u t D iG e o r g e ’Ss y n d r o m e ( D G C R 6

3、 ) i s n o to b t a i n e d f r o ma l ll i v i n gb e i n g s b e s i d e s s o m ea n i m a l s ．S of a r , D G C R 6h a v e a l r e a d yb e e no b t a i n e d f r o mh u m a n 、b u l l 、r a t 、s i l k w o r ma n d D

4、r o s o p h i l i d a e ．T h e p r o t e i ns e q u e n c ea n a l y s i ss u g g e s t st h a tD G C R 6 i s h i g h l yc o n s e r v e di nt h e e v o l u t i o n ．A c c o r d i n gt ot h ep r e s e n ts t u d MD G C R

5、 6 i s s o m ep r o t e i n w h o s ef u n c t i o ni s n o t c l e a r , i n c l u d i n gt h a t i t c a r l i n d u c en e u r o l o g i cd i s e a s e ，r e f e r r i n gs c h i z o p h r e n i a ．W eg e tt h ee D N A

6、 o ft h eD G C R 6 g e n ef r o m l a r g e - s c a l e e D N As e q u e n c e o fs i l k w o r m p u p a ，c o n s t r u c t s t h e p r o k a r y o t i ce x p r e s s i o n v e c t o ra n d e x p r e s s t h ef u s i o

7、n p r o t e i ni n E ．c o l iB L 2 1 ．S u b s e q u e n t l y , w ec a np r o d u c e i t sa n t i b o d y a n d t h e ns t u d y t h ef u n c t i o n o n n e u r o l o g i cd i s e a s e ．W e f o u n d o n e E S T s e q

8、 u e n c ew h i c h h a v ea c r i t i c a lr e g i o nn a m e d D G C R 6 i nt h ee D N A l i b r a r y , p l a n n i n gt o d os o m es t u d y o nt h eg e n e ．W en a m ei t a f t e r B m D G C R 6 ，．T h e f u l l - l

9、 e n g t ho f t h eg e n ei s 8 5 6b p ．I t c o n t a i n sa nO R F o f5 3 4 b p ．T h eh o m o l o g yb e t w e e n i t sc o d e d a m i n o a c i d sa n d o t h e r a d v a n c e d e u k a r y o t ei sa b o u t 3 0 ％一4

10、0 ％，b u t i t i sm o r es i m i l a rt o D r o s o p h i l a ．T h ee D N A o fB m D G C R 6 i s c o n t r a s t e dt o t h eG e n o m eo f B o m b y x m o r i ，t h e r e s u l t p r e s e n t st h e g e n eh a v ef o u r

11、e x o na n d t h r e ei n t r o n ，p r e d i c t i n gi t h a v e17 7a m i n oa c r i d sa n di t sm o l e c u l a rw e i g h to f p r o t e i na b o u t2 0 ．7 3 7 k D ．A t p r e s e n t ，t h e r ea r en o t r e p o r t

12、so n t h eg e n ei nB o m b y x m o i l ，b u t o u r l a b h a v eal i b r a r y o f B o m b y x m o r i ’p u p a w h e r e w e f o u n dt h ee D N A s e q u e n c e ．A c c r o d i n g t ot h ec o n s e r v e d s e q u e

13、 n c e so fD G C R 6 g e n e o fm a n ys p e c i e sf r o mN C B I ，w ed e s i g nt h ep r i m e r s ，a n da m p l yt h eg e n eb yP C R ．N e x t ，w ei n s e r tt h eC D S o f B m D G C R 6 i n t op r o k a r y o t i ce

14、x p r e s s i o n v e c t o rp G E X 一4 T - 3b yd o u b l ed i g e s t i n g w i t h B a m H I a n d X h o I ，a n d o b t a i nt h er e c o m b i n a n t v e c t o r p G E X 一4 T ．- 3 一D G C R 6 ．T h e n t h er e c o m b

15、 i n a n t v e c t o ri st r a n s f o r m e di n t oB L 2 1 ，w ei d e n t i f yt h ec o r r e c tr e c o m b i n a n tv e c t o rt h r o u g hP C Ra n d d o u b l e d i g e s t i n g ．T h e r e c o m b i n a n t p r o t