肺炎性衰老的機(jī)制與白藜蘆醇的干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選炎性衰老特征性的炎癥細(xì)胞因子與受體基因，以及白藜蘆醇作用的靶基因，同時(shí)檢測(cè)老年大鼠肺組織中炎性衰老特征性炎性細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-αmRNA表達(dá)水平及白藜蘆醇的干預(yù)作用。探討炎性衰老在機(jī)體衰老中的作用，以及白藜蘆醇干預(yù)衰老的可能機(jī)制
　　方法:
　　1、清潔級(jí)雄性健康SD大鼠30只，隨機(jī)分為4m、24m和24m+白藜蘆醇(Res)三組，每組各10只。自21月滿

2、當(dāng)天開始，24m+ Res組予Res（按60mg/kg/d，融于5ml蒸餾水中）灌胃;24m組給予等量蒸餾水灌胃，連續(xù)90天。分別取出各組大鼠的肺組織。(1)應(yīng)用包含112個(gè)DNA的炎癥細(xì)胞因子與受體基因芯片對(duì)4m、24m和24m+Res各組大鼠肺組織基因表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。提取等量的大鼠肺組織mRNA后，分別用cy-3、cy-5逆轉(zhuǎn)錄熒光標(biāo)記，制作cDNA探針，混合后與上述微矩陣芯片雜交。用Scan Array3000掃描儀掃描雜交信號(hào)熒光

3、強(qiáng)度，并利用生物信息學(xué)方法對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，分別繪制4m、24m和24m+Res各組肺組織基因表達(dá)譜，對(duì)芯片資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析以尋找待比較組之間有表達(dá)差異的基因。
　　2、取各組大鼠肺組織，抽取總mRNA。采用Realtime PCR法檢測(cè)肺組織中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α mRNA表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、在肺組織中，與4m組相比，24m組表達(dá)上調(diào)（信號(hào)比的對(duì)數(shù)值SLR＞2）的促炎性反應(yīng)細(xì)胞因

4、子與受體基因10個(gè):Cxc1l2、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-1rⅡ、IL-6、IL-7、TNF、TNFsf4、TNFsf11，表達(dá)下調(diào)(SLR＜-2)的抗炎細(xì)胞因子與受體基因有:IL-10rα、TGF-α、TGF-31共3個(gè)。與24m組相比，24m+Res組中表達(dá)上調(diào)(SLR＞2)的抗炎細(xì)胞因子與受體基因有:IL-10、IL-10rα、Cc12、TGF-β3、TGF-βrⅡ共5個(gè)，下調(diào)(SLR＜-2)的促炎細(xì)胞因子與受體基

5、因有:IL-1β、IL-6、TNF、TNFsf4共4個(gè);上述各組之間的比較都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(P＜0.05)。上述差異表達(dá)的炎癥細(xì)胞因子與受體基因涉及白介素、趨化因子、腫瘤壞死因子等。
　　2、24m組肺組織中TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)水平都顯著高于4m組(P＜0.01)，而IL-10 mRNA表達(dá)水平明顯降低(P＜0.01);與24m組比較，24m+Res組TNF-α、IL-6和IL-1β mRNA表達(dá)水平

6、都明顯降低(P＜0.01);24m+ Res組中IL-10 mRNA水平均顯著高于24m組(P＜0.01)，與前面基因芯片結(jié)果相符合。
　　結(jié)論:
　　1、老年大鼠肺組織內(nèi)存在促炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)上調(diào)，抗炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)下調(diào)，導(dǎo)致促-抗炎性細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)和促-抗炎反應(yīng)體系平衡失調(diào)，這可能是肺炎性衰老發(fā)生的機(jī)制。
　　2、Res通過下調(diào)促炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)和上調(diào)抗炎性細(xì)胞因子基因表達(dá)，重塑促炎/抗炎細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)