白藜蘆醇對(duì)雛雞免疫應(yīng)激的調(diào)控及其機(jī)制研究.pdf

1、本論文通過(guò)飼養(yǎng)試驗(yàn)和體外細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)，研究了白藜蘆醇（RES）對(duì)免疫應(yīng)激雛雞生長(zhǎng)性能及免疫功能的調(diào)控作用及其分子機(jī)制，并探討了RES通過(guò)NF-κB信號(hào)通路對(duì)免疫應(yīng)激調(diào)控的細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。
　　試驗(yàn)一:研究不同添加水平的RES對(duì)生產(chǎn)中頻繁疫苗免疫的雛雞生長(zhǎng)性能的調(diào)控作用及其機(jī)制。選1日齡蛋雛雞300只，隨機(jī)分為5個(gè)處理組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10只雞。陰性對(duì)照組不免疫且飼喂基礎(chǔ)日糧，RES試驗(yàn)組每周免疫一次且在基礎(chǔ)日糧基礎(chǔ)上添加

2、0,200,400和800 mg/kg的RES。試驗(yàn)期40天。結(jié)果表明：免疫處理組的平均日增重（ADG）顯著小于不免疫的對(duì)照組。隨著RES添加量的增加，免疫組雛雞的ADG、血清IGF-1及肝細(xì)胞中的生長(zhǎng)激素受體(GHR) mRNA表達(dá)量呈二次曲線增加。肝細(xì)胞中NF-κB mRNA表達(dá)量、脾臟細(xì)胞中的IL-1β和TNF-αmRNA表達(dá)量隨著RES水平增加線性降低。小結(jié)：生產(chǎn)中頻繁的疫苗免疫使雛雞的生長(zhǎng)性能受到抑制。在雛雞日糧中添加400

3、mg/kg的RES能有效緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制。RES緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的生長(zhǎng)抑制的可能機(jī)制是：RES下調(diào)了NF-κB的表達(dá)及激活，從而使炎性因子TNF-α及IL-6的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)量降低，緩解了機(jī)體炎性反應(yīng)并促進(jìn)了動(dòng)物生長(zhǎng)。
　　試驗(yàn)二:研究不同添加水平的RES對(duì)生產(chǎn)中頻繁疫苗免疫的雛雞免疫機(jī)能的調(diào)控作用及其機(jī)制。試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)一。結(jié)果表明：免疫組與對(duì)照組相比，雞新城疫(ND)、禽流感病毒H5(H5)和禽流感病毒H9(H9)抗體滴

4、度及血清IgG水平顯著升高而CD4+/CD8+比率顯著降低，胸腺和法式囊細(xì)胞凋亡顯著增加，且胸腺細(xì)胞中死亡受體Fas的配體FasL的相對(duì)表達(dá)顯著增加。隨著RES添加量的增加，CD4+/CD8+比率、ND和H5抗體滴度以及胸腺淋巴細(xì)胞增殖指數(shù)和胸腺相對(duì)重量呈二次曲線增加而脾臟和法氏囊淋巴細(xì)胞凋亡率線性降低。FasL表達(dá)量線性降低。小結(jié)：生產(chǎn)中頻繁的疫苗免疫提高了機(jī)體再次免疫應(yīng)答抗體IgG水平卻促進(jìn)了免疫器官的細(xì)胞凋亡，使機(jī)體免疫機(jī)能受到抑

5、制。在雛雞日糧中添加400 mg/kg的RES能有效緩解免疫器官細(xì)胞凋亡并增強(qiáng)免疫系統(tǒng)功能，提高血清中ND、H5、 H9、IgM抗體水平及CD4+/CD8水平。RES緩解免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的免疫抑制的可能機(jī)制是：RES通過(guò)抑制FasL促凋亡基因的表達(dá)從而減少了免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡，促進(jìn)了免疫器官細(xì)胞的發(fā)育和免疫功能。
　　試驗(yàn)三:研究RES對(duì)LPS誘導(dǎo)的雛雞免疫應(yīng)激的調(diào)控作用及其機(jī)制。通過(guò)給肉仔雞在7日齡、21日齡和36日齡時(shí)注射

6、LPS建立免疫應(yīng)激模型，進(jìn)一步探索RES對(duì)LPS免疫應(yīng)激誘導(dǎo)的肉仔雞生長(zhǎng)性能和免疫功能的調(diào)控作用及其機(jī)制。選用1日齡肉仔雞120只，隨機(jī)分為4個(gè)處理組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只雞。采用2×2因子設(shè)計(jì)：日糧類型(400 mg/kgRES或0 mg/kgRES)和免疫應(yīng)激(注射LPS或生理鹽水)。試驗(yàn)期49天。結(jié)果表明：在LPS刺激情況下，日糧RES添加使肉仔雞血清中皮質(zhì)酮水平顯著降低，肉仔雞生長(zhǎng)后期以及平均日增重顯著增加，料肉比顯著降低

7、。LPS免疫應(yīng)激情況下日糧添加400 mg/kgRES使免疫應(yīng)激肉仔雞胸腺指數(shù)顯著增加，胸腺和肝臟細(xì)胞凋亡率顯著降低；血清中SOD和T-AOC顯著增加， MDA顯著降低；血清中IgG和C3含量顯著增加；淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和淋巴細(xì)胞亞群CD4/CD8比例顯著增加。小結(jié)：頻繁的LPS免疫應(yīng)激使肉仔雞的生長(zhǎng)性能和免疫功能受到抑制。免疫應(yīng)激情況下，在日糧中添加RES能夠減少肝臟細(xì)胞的氧化損傷和凋亡，提高肝臟代謝功能，改善肉仔雞生長(zhǎng)性能。日糧添加RE

8、S降低了免疫應(yīng)激肉仔雞淋巴細(xì)胞凋亡，增加免疫器官指數(shù)，使血清中IgG和C3含量增加，淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和淋巴細(xì)胞亞群CD4/CD8比例增加，增加機(jī)體的特異性免疫功能。
　　試驗(yàn)四:體外培養(yǎng)雛雞外周血淋巴細(xì)胞研究不同水平的RES（0μg/mL;20μg/mL;40μg/mL;80μg/mL）對(duì)LPS刺激的雛雞外周血淋巴細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路的調(diào)控。結(jié)果表明：LPS刺激顯著降低了淋巴細(xì)胞活性并增加了淋巴細(xì)胞凋亡率和凋亡蛋白的表達(dá)，并增加了

9、外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α及ROS的表達(dá)水平。40μg/mL和80μg/mLRES添加顯著降低了淋巴細(xì)胞凋亡率并增加了淋巴細(xì)胞活性。RES添加使淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中NF-κB的活性顯著降低，IκB蛋白的表達(dá)水平顯著增加。40μg/mL和80μg/mLRES添加使外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)液中中Fas和Caspase-8凋亡蛋白的表達(dá)量顯著降低。小結(jié)：RES對(duì)NF-κB信號(hào)通路有負(fù)調(diào)控作用，從而緩解機(jī)體炎性反應(yīng)和淋巴細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：