白藜蘆醇影響核仁功能及其分子機制的研究.pdf

1、研究目的:
　　初步探討白藜蘆醇（resveratrol，簡稱Res）對核仁功能的影響和其如何通過PI3K/Akt這個信號通路來影響核仁功能的。
　　方法和結(jié)果:
　　1.通過MTT、細胞克隆形成和DAPI染色技術(shù)檢測Res對細胞增殖率、克隆形成和細胞凋亡的影響，結(jié)果表明100μ mol/L的Res作用48h即可以抑制HeLa細胞的增殖和克隆形成，并在400μ mol/L及其以上濃度時完全抑制HeLa細胞的增殖和克隆形

2、成。
　　2.通過Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)和Realtime PCR技術(shù)檢測Res對HeLa細胞內(nèi)rDNA啟動子活性、HeLa細胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子在rDNA上的富集倍數(shù)和pre-rRNA表達的影響，結(jié)果表明:Res作用3h后即可抑制HeLa細胞內(nèi)rDNA啟動子活性;Res作用12h后，隨著濃度的增加，轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194在rDNA上的富集倍數(shù)逐漸降低，換言之，即轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA

3、聚合酶的亞基RPA194的活性降低;12h后對pre-rRNA的表達量相對不加藥組抑制率達70％左右，并呈現(xiàn)濃度和時間依賴趨勢。
　　3.通過Western Blotting技術(shù)檢測Res對和PI3K/Akt信號通路上的主要成員的表達及活化情況，結(jié)果表明:隨著濃度的增加和作用時間的延長，HeLa細胞內(nèi)PI3K/Akt這個信號通路上主要成員UBF和Akt的表達無較大改變，但其活化水平顯著降低，并呈現(xiàn)濃度和時間依賴趨勢;與抑制劑PI3

4、Kα、PI3Kβ和Ly294002抑制效果的結(jié)果比較表明:抑制劑PI3Kα的抑制效果最好，這就說明PI3K/Akt信號通路上的，起主要作用的是啟始位點的PI3Kα亞型。
　　4.通過Luciferase Assay技術(shù)、CHIP技術(shù)、Realtime PCR技術(shù)和WesternBlotting技術(shù)檢測Res對PI3Kα亞型活化后的HeLa細胞的影響，結(jié)果表明:Res可以抑制PI3K/Akt信號通路活化后rDNA啟動子的活性，降低R

5、NA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194的活性，下調(diào)pre-rRNA的表達，抑制PI3K/Akt這個信號通路上主要成員UBF和Akt的活化。
　　結(jié)論:
　　Res能有效抑制HeLa細胞的增殖并促進HeLa細胞的凋亡，降低rDNA啟動子的活性，降低轉(zhuǎn)錄因子UBF和RNA聚合酶Ⅰ的亞基RPA194的活性，下調(diào)pre-rRNA的表達水平，降低PI3K/Akt信號通路中UBF與Akt的磷酸化水平，對完全活化的PI3Kα亞型亦有明顯的抑制作用