交泰丸在正常和PCPA失眠大鼠的藥動學(xué)和PK-PD結(jié)合模型研究.pdf

1、目的:
　　交泰丸是治療心腎不交的經(jīng)典名方，原小檗堿型生物堿是交泰丸中具有代表性的活性成分，本文擬應(yīng)用PK-PD結(jié)合模型的研究思路，運用腦微透析的研究方法，對交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿五種原小檗堿型生物堿的藥動學(xué)和PK-PD結(jié)合模型研究，為進一步探究交泰丸治療心腎不交失眠的作用機理和臨床的合理用藥提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根

2、堿在血漿的含量測定
　　采用BDS Hypersil C18液相色譜柱(50×2.1 mm i.d.，2.4μ m，Thermo Scientific)作為固定相，流動相為乙腈-水（含5mmol醋酸銨并用甲酸將pH值調(diào)至5.0），流速為0.25 mL/min，柱溫為30℃，以四氫巴馬汀作為內(nèi)標，用電噴霧離子化和正離子多離子反應(yīng)監(jiān)測模式檢測，并考察方法的專屬性、線性范圍、精密度、準確度和穩(wěn)定性。
　　2.交泰丸單次和多次給藥后

3、在正常和PCPA失眠模型大鼠的藥動學(xué)研究
　　模型組大鼠腹腔注射300 mg/kg對氯苯丙氨酸(PCPA);正常組注射同樣劑量的生理鹽水，大鼠失眠模型復(fù)制成功后，多次給藥組每天給予交泰丸灌胃液3 mL/kg，連續(xù)7天，單次給藥組一次給予交泰丸灌胃液3 mL/kg后開始大鼠眼眶靜脈叢取血。以LC-MS/MS法測定各時間點血漿中小檗堿濃度，以Winnonlin5.0.1軟件求算藥動學(xué)參數(shù)，并采用SPSS17.0軟件對正常和失眠大鼠的主

4、要藥動學(xué)參數(shù)進行t檢驗。
　　3.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在腦微透析液中的含量測定
　　色譜柱為液相BDS Hypersil C18(50×2.1 mm i.d.，2.4μm, ThermoScientific)，采用梯度洗脫，0-3.7 min時，流動相A:75％→25％;3.7-4.0min時，流動相A為25％，流速為0.25 mL/min。流動相A為pH5.0的甲酸水（含5mmol醋酸

5、銨并用甲酸將pH值調(diào)至5.0），流動相B為乙腈。對五種原小檗堿型生物堿的腦微透析樣品進行專屬性、準確度、精密度、線性、穩(wěn)定性、交互效應(yīng)和柱后效應(yīng)方法學(xué)驗證。
　　4.交泰丸主要活性成分在正常和失眠模型大鼠的PK-PD結(jié)合模型研究
　　大鼠腦立體定位儀定位，定位坐標AP:-5.2mm; ML:+4.5mm; DV:-3.8mm，于大鼠大腦海馬內(nèi)埋入探針套管，用螺絲釘及牙科水泥固定，清理并縫合創(chuàng)口。待大鼠恢復(fù)3d后，模型組大鼠一

6、次性腹腔注射PCPA300 mg/kg;正常組注射同樣劑量的生理鹽水，30 h造成大鼠完全失眠后，在清醒狀態(tài)下插入微透析探針，以人工腦脊液2μL/min的速度灌流。以給藥后為0點，每30 min收集1管透析液，其中30μL測定神經(jīng)遞質(zhì)含量，另30μL測定交泰丸中生物堿，持續(xù)10 h，將樣品放入LC-MS/MS系統(tǒng)進行測定。
　　結(jié)果:
　　1.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在血漿的含量測定

7、　　成功建立了同時測定大鼠血漿中交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿的分析方法。該方法簡單、靈敏、快捷，需要的血漿量少，分析時間短，且方法學(xué)考察符合生物樣品檢測的要求，可為交泰丸的藥動學(xué)研究提供可靠又便捷的檢測手段。
　　2.交泰丸單次和多次給藥后在正常和PCPA失眠模型大鼠的藥動學(xué)研究
　　原小檗堿型生物堿在單次給藥后正常大鼠體內(nèi)的生物利用度較差，且達峰時間長，多次給藥交泰丸后原小檗堿型生物堿的藥動學(xué)

8、參數(shù)都與單次給藥組具有顯著性差異，這提示多次給藥有可能增加原小檗堿型生物堿在體內(nèi)的吸收，導(dǎo)致藥物在體內(nèi)的累積。原小檗堿型生物堿在失眠大鼠體內(nèi)的吸收比正常組好，生物利用度大大增加，這有利于其在疾病體內(nèi)迅速達到有效治療濃度，從而發(fā)揮其藥理作用。
　　3.交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根堿在腦微透析液中的含量測定
　　成功建立了同時測定大鼠腦微透析液中交泰丸主要活性成分小檗堿、巴馬汀、黃連堿、表小檗堿和藥根

9、堿的分析方法，該方法在原有方法的基礎(chǔ)上，優(yōu)化了色譜條件，達到了更低的定量下限，縮短了分析時間，并且簡化了樣品處理過程，使得方法操作簡便有效。專屬性、準確度、精密度、線性、穩(wěn)定性、交互效應(yīng)和柱后效應(yīng)考察結(jié)果表明該方法符合生物樣品檢測要求。
　　4.交泰丸主要活性成分在正常和失眠模型大鼠的PK-PD結(jié)合模型研究
　　正常組與模型組的腦內(nèi)藥動學(xué)行為具有顯著性差異，模型組五個原小檗堿型生物堿的生物利用度高于正常組，此外，對比血漿藥動

10、學(xué)的研究結(jié)果，五個原小檗堿型生物堿的腦部藥動學(xué)與血漿藥動學(xué)行為顯著不同(主要表現(xiàn)為Cmax、Tmax和AUC)。說明五個原小檗堿型生物堿能透過血腦屏障，直接作用于海馬體。模型組中的原小檗堿型生物堿多巴胺的Fmax均較正常組明顯提高，而模型組中原小檗堿型生物堿的ECe50較正常組為小，提示交泰丸中主要活性成分在模型大鼠體內(nèi)DA藥效較正常大鼠增強。
　　結(jié)論:
　　交泰丸中原小檗堿型生物堿在正常和模型組大鼠的血漿、腦局部的藥動學(xué)

11、行為都具有顯著性差異，無論是血漿還是腦局部藥動學(xué)，模型組大鼠的生物利用度大于正常組，且血漿藥動學(xué)中，多次給藥比單次給藥的生物利用度更高。交泰丸主要活性成分的腦部藥動學(xué)與血漿藥動學(xué)行為顯著不同，表明五個原小檗堿型生物堿能透過血腦屏障，直接作用于海馬體。交泰丸中主要活性成分在模型大鼠體內(nèi)多巴胺藥效較正常大鼠增強，且其在失眠大鼠體內(nèi)更快達到效應(yīng)部位。交泰丸治療心腎不交失眠的作用機制可能是通過對多巴胺的影響，從而使其發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠的作用。而對于其