脊髓水平NR2B與PSD-95間相互作用在小鼠骨癌痛維持中的作用.pdf

1、目的:探討PSD-95與NMDA受體NR2B亞基間相互作用在小鼠骨癌痛維持中的作用
　　方法: C3H/HeJ小鼠隨機(jī)分為腫瘤組(T組)、假手術(shù)組(S組)。將含2×108個纖維肉瘤細(xì)胞的最小必需培養(yǎng)基(α-MEM)注射到T組小鼠右側(cè)股骨遠(yuǎn)端骨髓腔內(nèi)，制作骨癌痛模型。S組注入不含腫瘤細(xì)胞的α-MEM。N組不進(jìn)行手術(shù)操作。T組和S組于術(shù)前1d，術(shù)后第3，5，7，10，14d檢測機(jī)械刺激縮足閾值(PWMT)和熱刺激縮足潛伏期(PWTL)

2、等痛行為學(xué)指標(biāo)。術(shù)后第14d T組再隨機(jī)分為3組：小肽處理組(T1組)，小肽同分異構(gòu)體對照組(T2組)，溶媒對照組(T3組)。術(shù)后14d上午08:00 T1、T2組分別鞘內(nèi)注射Myr-NR289c或其同分異構(gòu)體Myr-NR2BAA1μg，體積5μL；T3組給與等量溶媒。給藥后2、4、6、8、10、12、24h檢測痛行為學(xué)。給藥后2h，T1、T2、T3組小鼠取脊髓腰膨大進(jìn)行免疫共沉淀檢測NR2B與PSD-95間相互作用情況。選取接種后5d

3、、7d、10d、14d和給與Myr-NR289c后2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h的小鼠提取脊髓腰膨大進(jìn)行western blot檢測NR2B、PSD-95、nNOS表達(dá)水平，取材均于行為學(xué)測定后進(jìn)行。
　　結(jié)果:
　　1)與S組相比，T組小鼠接種腫瘤細(xì)胞后7d出現(xiàn)機(jī)械敏，PWMT(1.17±0.27)g，10 d出現(xiàn)熱痛敏，PWTL(12.62±1.96)s，逐漸下降，14 d降低至PWMT(0.51±0.2

4、0)g，PWTL(10.78±1.57)s。鞘內(nèi)給于小肽Myr-NR289c后2 h，PWMT以及PWTL明顯升高，且在4h達(dá)到頂峰，這種差異在給藥后持續(xù)至10h，均未能恢復(fù)到假手術(shù)組水平。鞘內(nèi)注射Myr-NR289c對正常小鼠痛行為無影響。
　　2)免疫共沉淀結(jié)果顯示：與溶媒組(T3組)相比，鞘內(nèi)給與小肽Myr-NR289c后，脊髓腰膨大PSD-95與NR2B間相互作用比率顯著減少(P<0.05)，而小肽同分異構(gòu)體Myr-NR2

5、BAA無效果。
　　3)Western Blot結(jié)果：與S組相比，從接種后第5d開始，T組小鼠NR2B、PSD-95、nNOS表達(dá)水平增高。與給藥前基礎(chǔ)值相比，鞘內(nèi)給于小肽Myr-NR289c后2h、4h、6h、8h、10h NR2B顯著降低(P＜0.05)，給藥后2h PSD-95顯著降低(P<0.05)，給藥后6h、8h、10h nNOS顯著降低(P<0.05)。
　　結(jié)論:脊髓水平NR2B與PSD-95間相互作用在小鼠