鞘內(nèi)注射細胞周期依賴性激酶5抑制劑-Roscovitine對骨癌痛小鼠行為學及脊髓NR2B mRNA表達的影響.pdf

1、目的:探討鞘內(nèi)給予細胞周期依賴性激酶5(Cdk5)特異性拮抗劑Roscovitine對骨癌痛小鼠的行為學及脊髓水平NR2B mRNA表達的影響。
　　 方法:雄性C3H/HeJ小鼠102只,隨機分為假手術(shù)組(n=30)和腫瘤組(n=72)。腫瘤組于小鼠右側(cè)股骨遠端骨髓腔接種NCTC2472溶骨性纖維肉瘤細胞,建立骨癌痛模型;假手術(shù)組注入不含腫瘤細胞的α-MEM。各組于術(shù)前1 d,術(shù)后3 d、5 d、7 d、10 d、14 d隨機

2、取6只小鼠檢測痛行為學指標:機械痛縮足閾值(paw withdrawalmechanical threshold,PWMT)和熱痛縮足潛伏期(paw withdrawal thermal latency,PWTL)。術(shù)后14 d,腫瘤組再隨機分為4組,即:Roscovitine5μg組(n=6)(R1組)、Roscovitine10μg組(n=6)(R2組)、Roscovitine20μg組(n=30)(R3組)和溶媒組(n=30)(1

3、0％dimethyl sulphoxide,DMSO)(T組);假手術(shù)組(n=30)即為S組。R3組和T、S組給藥后根據(jù)觀察時間點(注射前1 h、注射后6、24、48和72 h)又進一步分為5小組,每組6只;R1、R2、R3組鞘內(nèi)注射相應(yīng)劑量的Roscovitine,T、S組給予10％DMSO,注藥體積均為5μl,鞘內(nèi)注射前1 h及注射后6 h、24 h、48h、72 h再測定痛行為學;S組、T組和R3組的小鼠在注射前1 h、注射后6

4、h、24 h和48 h痛行為學測定后,斷頭處死,取L3～5脊髓,采用RT-PCR(Reverse transcriptivepolymerase chain reaction,RT-PCR)法測定脊髓組織NR2B mRNA的表達水平。
　　 結(jié)果:(1)各組術(shù)前基礎(chǔ)機械縮足閾值及熱縮足潛伏期比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);所有小鼠在接種后3 d都出現(xiàn)痛行為學改變,但腫瘤組和假手術(shù)組小鼠之間的差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)

5、;接種后5 d,所有小鼠的痛行為學指標都恢復到接種前水平;接種后7 d,腫瘤組小鼠的PWMT(1.05±0.26)g,與假手術(shù)組鼠(1.85±0.28)g相比明顯降低(P＜0.05);接種后10 d,腫瘤組小鼠的PWTL(12.6±1.2)s較假手術(shù)組小鼠(18.6±2.0)s明顯縮短(P＜0.05),腫瘤組小鼠的痛行為學隨時間逐漸加重,與假手術(shù)組小鼠比較有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.05);(2)制模術(shù)后14 d鞘內(nèi)給藥前,T組小鼠的PW

6、MT及PWTL與R1、R2、R3組之間的差別無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);R1組小鼠鞘內(nèi)注射Roscovitine5μg后,各時間點的PWMT及PWTL與T組及給藥前相比無統(tǒng)計學差異(P＞0.05);R2組小鼠鞘內(nèi)注射Roscovitine10μg24 h后,PWMT從(0.50±0.11)g增加到(0.73±0.24)g,PWTL從(10.5±0.7)s增加到(13.4±0.5)s,48 h后藥物改善骨癌痛行為學的作用消失;R3組小鼠

7、鞘內(nèi)注射Roscovitine20μg24 h后,PWMT從(0.50±0.11)g增加到(0.90±0.19)g,PWTL從(10.7±1.5)s增加到(15.0±1.1)s,48 h后改善的PWMT和PWTL有所下降,72h后藥物改善骨癌痛行為學的作用消失;(3)鞘內(nèi)注射24 h后,R3組小鼠脊髓水平NR2B mRNA的表達(0.55±0.03)較T組(0.63±0.01)降低(P＜0.05);48 h后,R3組小鼠脊髓水平NR2B