KA2012MBL復(fù)合提取液對K562-S細(xì)胞周期阻滯和凋亡誘導(dǎo)作用.pdf

1、目的:
　　KA2012MBL復(fù)合提取液以牡蠣肉為主料，以黃芪、枸杞、植物源維生素C為輔料，有效成分均來自純天然植物和海洋精華，含有人體所需的多種氨基酸、植物多糖、?；撬帷⒕S生素、微量元素及其他生物活性物質(zhì)。前期研究發(fā)現(xiàn)具有顯著增強(qiáng)免疫力功效。本文主要研究KA2012MBL復(fù)合提取液對人白血病細(xì)胞K562和人胃癌細(xì)胞HGC-27的細(xì)胞毒活性，初步探索KA2012MBL復(fù)合提取液的抗腫瘤機(jī)制。
　　方法:
　　1.KA2

2、012MBL復(fù)合提取液對各細(xì)胞系的細(xì)胞毒活性:
　　系列濃度(v/v:0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125，0.0015625，0.00078125,0.000390625,0.0015625,0.00078125,0.000390625)的KA2012MBL復(fù)合提取液和人白血病細(xì)胞K562和人胃癌細(xì)胞HGC-27作用48小時后，應(yīng)用SRB法檢測KA2012MBL復(fù)合提取液對各細(xì)胞的細(xì)胞毒性，用酶標(biāo)

3、儀測定吸光度后計算細(xì)胞生存率:生存率(survival rate(％))=(T-B)/(U-B)×100％。
　　2.KA2012MBL復(fù)合提取液對P-gp介導(dǎo)的多重耐藥性的檢測
　　系列濃度(v/v:0.05，0.025，0.0125，0.00625，0.003125，0.0015625，0.00078125，0.000390625)的KA2012MBL復(fù)合提取液和P-gp底物類化療藥物阿霉素對K562細(xì)胞P-gp高表達(dá)株

4、(K562/A)和K562細(xì)胞P-gp低表達(dá)株(K562/S)作用48小時后，應(yīng)用SRB法檢測KA2012MBL復(fù)合提取液和阿霉素對K562/A、K562/S細(xì)胞的抑制作用，用酶標(biāo)儀測定吸光度后計算細(xì)胞生存率。
　　3.KA2012MBL復(fù)合提取液的抗腫瘤機(jī)制
　　(1)KA2012MBL復(fù)合提取液對K562/S細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)、周期阻滯和線粒體膜電位的作用
　　KA2012MBL復(fù)合提取液和K562/S細(xì)胞作用48小時

5、后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分別檢測該復(fù)合提取液對K562/S細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)、周期阻滯和線粒體膜電位的作用，分析KA2012MBL復(fù)合提取液刺激后，K562/S細(xì)胞凋亡細(xì)胞數(shù)，DNA含量和線粒體膜電位的改變情況。
　　(2)KA2012MBL復(fù)合提取液對K562/S細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
　　KA2012MBL復(fù)合提取液和K562/S細(xì)胞作用48小時后，應(yīng)用western blot檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax的表達(dá)情況。

6、r>　　結(jié)果:
　　1.人白血病細(xì)胞K562和人胃癌細(xì)胞HGC-27與KA2012MBL復(fù)合提取液作用48小時后，生長均受到劑量依賴性抑制。
　　2.KA2012MBL復(fù)合提取液對K562/A和K562/S細(xì)胞的細(xì)胞毒活性相似，其IC50值分別為1.10±0.17、1.11±0.16(v/v％);而阿霉素對K562/A和K562/S細(xì)胞作用的IC50值分別為54.58±2.48、8.08±0.75(μM)，說明KA2012M

7、BL復(fù)合提取液可以克服P-gp介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞多藥耐藥。
　　3.KA2012MBL復(fù)合提取液可以有效誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡。同時KA2012MBL復(fù)合提取液誘導(dǎo)發(fā)生凋亡的K562/S細(xì)胞線粒體膜電位降低，線粒體膜通透性增加，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)下降，且由于K562/S細(xì)胞的胞內(nèi)ATP水平下降，引發(fā)促凋亡蛋白Bax表達(dá)增加。KA2012MBL復(fù)合提取液是通過線粒體途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并且可以將K562/S細(xì)胞的細(xì)胞周期阻遏在S期。<

8、br>　　結(jié)論:
　　1.KA2012MBL復(fù)合提取液對人白血病細(xì)胞株K562/S、人胃癌細(xì)胞HGC-27均有細(xì)胞毒活性，能抑制腫瘤細(xì)胞增殖。同時，能有效克服P-gp介導(dǎo)的多藥耐藥性。
　　2.KA2012MBL復(fù)合提取液可以有效誘導(dǎo)K562細(xì)胞的Bcl-2/Bax比例下降，線粒體膜通透性增加以及膜電位降低，從而開啟線粒體途徑的細(xì)胞凋亡細(xì)胞過程，殺死腫瘤細(xì)胞。同時，由于K562/S細(xì)胞周期被阻滯于S期，周期阻遏也是該復(fù)合提取