豨薟草提取液的質(zhì)量控制以及豨薟草提取液對MPP+誘導的PC12細胞凋亡的保護作用.pdf

1、豨薟草具有祛風濕、利關節(jié)、解毒的功效，常用于風濕痹痛、筋骨無力、腰膝酸軟、四肢麻痹、半身不遂、風疹濕瘡等癥。其化學成分主要含萜和苷類等，其中奇壬醇、豨薟精醇、豨薟苷在免疫調(diào)節(jié)、抗炎抗風濕、心血管系統(tǒng)、抗病原微生物、抗氧化及抗早孕方面有明顯活性。在國內(nèi)已有學者研究證明，豨薟草提取液能明顯保護腦缺血再灌注的大腦皮層神經(jīng)元損傷模型，其機制與豨薟草抗氧化作用有關。但是關于豨薟草提取液治療帕金森癥的物質(zhì)基礎和具體作用機制在國內(nèi)外尚未見報道。

2、>　　本課題建立了豨薟草的HPLC指紋圖譜共有模式，對不同產(chǎn)地，不同批次的藥材進行了相似度比較，并結合定量測定結果對各批藥材進行評價。采用正交試驗設計，以奇壬醇的提取率為考察指標，考察提取溶媒及溶媒用量、提取時間、提取次數(shù)等4個因素對提取結果的影響，篩選了豨薟草的最佳提取工藝。同時，利用帕金森病的細胞模型，探討了豨薟草提取液對1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導的PC12細胞損傷是否具有保護作用，并探討其作用機制。
　　第一

3、部分 豨薟草的高效液相色譜指紋圖譜研究
　　目的:建立豨薟草的HPLC指紋圖譜，得到對照圖譜，與不同產(chǎn)地、不同批次豨薟草藥材的指紋圖譜相比較，并測定各批藥材中奇壬醇、豨薟苷、豨薟精醇的含量，為科學評價與有效控制豨薟草藥材質(zhì)量提供方法。
　　方法:色譜柱為Kromasil WQ C8柱（250mm×4.6mm，5μm），流動相為甲醇-乙腈-0.05mol·L-1 KH2PO4溶液進行梯度洗脫，柱溫30℃，檢測波長為215nm，

4、流速1 mL·min-1。
　　結果:建立了豨薟草的HPLC指紋圖譜共有模式，對不同產(chǎn)地，不同批次的藥材進行了相似度比較，并結合定量測定結果對各批藥材進行評價。
　　結論:本方法操作簡便、快速、準確，為豨薟草藥材的鑒別和全面質(zhì)量控制提供了新的依據(jù)。
　　第二部分 正交法試驗優(yōu)選豨薟草的提取工藝
　　目的:篩選豨薟草的最佳提取工藝。
　　方法:采用正交試驗設計，以奇壬醇的提取率為考察指標，考察提取溶媒及溶媒用

5、量、提取時間、提取次數(shù)等4個因素對提取結果的影響。
　　結果:豨薟草最佳提取條件為加12倍量的80％乙醇，回流提取3次，每次提取40 min。
　　結論:本工藝重現(xiàn)性好，測定方法可行，為大批量豨薟草提取奇壬醇提供了理論依據(jù)。
　　第三部分 豨薟草提取液對MPP+誘導的PC12細胞凋亡的保護作用
　　目的:探討豨薟草提取液對1-甲基-4-苯基吡啶離子(MPP+)誘導的PC12細胞損傷是否具有保護作用，并探討其作用機

6、制。
　　方法:在生長狀態(tài)良好的PC12細胞中加入終濃度為400μmol·L-1的MPP+，建立帕金森病的離體實驗模型，并觀察豨薟草提取液對MPP+誘導的PC12細胞損傷的保護作用。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，MTT法檢測細胞活力，DCFH-DA熒光探針法檢測細胞內(nèi)ROS水平。
　　結果:400μmol·L-1 MPP+作用PC12細胞，能明顯抑制細胞生長，誘導細胞凋亡，升高活性氧水平。同時給予不同濃度豨薟草提取液，PC12細