二烯丙基化三硫體外抗糞腸球菌生物膜作用的研究.pdf

1、目的：觀察大蒜素對照品二烯丙基化三硫(dially trisulfide，DATS)體外對生物膜中糞腸球菌的殺滅或抑制作用。
　　方法：⑴采用倍比稀釋法測定DATS和鹽酸多西環(huán)素對糞腸球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。⑵采用MTT法測定不同時間點的糞腸球菌活性，繪制細菌生長曲線;在96孔細胞培養(yǎng)板上培養(yǎng)細菌，形成不同生長周期的細菌生物膜，MTT法測定不同濃度的DATS或鹽酸多西環(huán)素對不同時期細菌生物膜的抑

2、菌率。⑶在牙本質(zhì)片上培養(yǎng)細菌，激光共聚焦顯微鏡(CLSM)觀察細菌生物膜形成過程中的形態(tài)特點;CLSM觀察不同濃度的DATS或鹽酸多西環(huán)素對不同生長周期細菌成熟生物膜的抗菌效果。
　　結(jié)果：①實驗組DATS對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)為1280μg/ml，最小殺菌濃度(MBC)為2560μg/ml;鹽酸多西環(huán)素對糞腸球菌MIC為80μg/ml，MBC為160μg/ml。②1280μg/ml DATS對對數(shù)期和饑餓期生物膜中糞

3、腸球菌抑菌率約71％，顯著高于對穩(wěn)定期生物膜中糞腸球菌的抑菌率58％，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);2560μg/ml DATS和5120μg/ml DATS抗生物膜糞腸球菌效果顯著優(yōu)于1280μg/ml DATS，其差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);5120μg/mlDATS對饑餓期生物膜糞腸球菌的抑菌率達97％，顯著高于其他濃度的DATS對各期生物膜糞腸球菌的抑菌率或該濃度DATS對其他兩期的抑菌率，結(jié)果均具有統(tǒng)計學(xué)差異(

4、P＜0.05);對照組鹽酸多西環(huán)素的濃度增高時抑菌率增大，80μg/ml的鹽酸多西環(huán)素抗對數(shù)期或饑餓期生物膜糞腸球菌的抑菌率與5120μg/mlDATS比較，差異性不具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，但該濃度鹽酸多西環(huán)素對穩(wěn)定期生物膜糞腸球菌的抑菌率優(yōu)于DATS組，差異性具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。③糞腸球菌生物膜具有立體空間結(jié)構(gòu)，生物膜由紅染區(qū)（死細菌）與綠染區(qū)（活細菌）組成。對數(shù)期、穩(wěn)定期、饑餓期生物膜均經(jīng)歷粘附、發(fā)展、成熟三個階

5、段，從粘附期至成熟期生物膜厚度增加，更結(jié)實致密;相同階段生物膜，饑餓期較對數(shù)期、穩(wěn)定期細菌密度低，結(jié)構(gòu)疏松，表面粗糙。實驗組DATS和對照組多西環(huán)素均能使糞腸球菌生物膜的激光共聚焦顯微影像紅染面積增加，即能殺滅或抑制生物膜糞腸球菌;且隨濃度增加，紅染面積增大，細菌生物膜更分散疏松。
　　結(jié)論：⑴DATS對生物膜中的糞腸球菌具有明顯殺滅或抑制作用。⑵DATS能破壞糞腸球菌的生物膜結(jié)構(gòu)，殺滅生物膜內(nèi)部的細菌。⑶DATS對饑餓期糞腸球菌