糞腸球菌生物膜動態(tài)觀察及對藥物敏感性研究.pdf

1、目的：國內(nèi)外的相關(guān)研究報道證實，糞腸球菌是根管充填完善但治療失敗的主要微生物原因，并主要以生物膜的形式定植于感染根管的牙本質(zhì)壁。目前大量實驗測定藥物對懸浮狀態(tài)糞腸球菌的抗菌效力，本課題利用激光共聚焦顯微鏡(CLSM)并借助熒光顯微鏡和普通光學(xué)顯微鏡觀察體外糞腸球菌生物膜的動態(tài)形成過程，重點比較研究了氫氧化鈣與洗必泰兩種抗菌劑對生物膜狀態(tài)糞腸球菌的敏感性，旨在探討兩種根管消毒劑作用后對再形成糞腸球菌生物膜的影響效果，揭示生物膜比懸浮菌具有

2、強大的抗藥性，為臨床上有效控制糞腸球菌感染，提高根管治療和根管再治療的成功率提供理論依據(jù)。 方法：實驗一利用在玻片上生成的生物膜模型，預(yù)實驗用普通光學(xué)顯微鏡觀察糞腸球菌生物膜的形成過程；用LIVE/DEADBaeLight Bacterial Viability Kit(MolecularProbes L7012 USA)對生物膜細菌進行染色，將染色后的生物膜置于CLSM 下觀察生物膜的內(nèi)部結(jié)構(gòu)，定量研究了生物膜的厚度，內(nèi)層、中

3、間層與外層的細菌密度和細菌活性，并做了統(tǒng)計學(xué)分析。實驗二首先用二倍稀釋法測定洗必泰對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，然后利用激光共聚焦顯微鏡(CLSM)并借助熒光顯微鏡比較了洗必泰與氫氧化鈣兩種藥物對糞腸球菌生物膜的作用效果，再用正常培養(yǎng)24h的成熟生物膜作對照，進一步用統(tǒng)計學(xué)方法定量分析了藥物作用后再培養(yǎng)24 h生物膜在細菌密度和活性的差異。 結(jié)果：實驗一初步確定了生物膜的基本形成時間為6h，成熟時間

4、為24 h，觀察到糞腸球菌生物膜的厚度變化；膜內(nèi)細菌主要集中在內(nèi)層和中間層，外層分布較少；膜內(nèi)活菌主要集中在中間層，內(nèi)層和外層較少；洗必泰對糞腸球菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)分別是0.03125％、0.0625％；觀察到了糞腸球菌生物膜對2％洗必泰和氫氧化鈣(PH=10)強大抗菌活性，即大劑量抗菌藥作用后，生物膜的基本結(jié)構(gòu)單位微菌落仍然存在的事實；洗必泰與氫氧化鈣兩種藥物對糞腸球菌生物膜作用后，再形成生物膜的細菌密