腸球菌心內(nèi)膜炎抗原efaA在糞腸球菌生物膜形成中的作用.pdf

1、目的：探討腸球菌心內(nèi)膜炎抗原efaA與腸球菌生物膜形成之間的相關(guān)性，為深入研究腸球菌生物膜的致病性及耐藥性奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：
　　 1.利用普通光學(xué)顯微鏡觀察efaA+、efaA-糞腸球菌在玻片上的生物膜形成過(guò)程，初步判定腸球菌生物膜形成各階段的時(shí)間點(diǎn)；
　　 2.微量滴定板法比較efaA+、efaA-糞腸球菌的生物膜形成能力：細(xì)菌接種至96孔板中，培養(yǎng)不同時(shí)間后棄去培養(yǎng)液，結(jié)晶紫染色，乙醇-丙酮混合液溶解

2、，酶標(biāo)儀測(cè)定比較不同階段efaA+、efaA-菌的OD570值；
　　 3.MTT法比較efaA+、efaA-糞腸球菌生物膜的活菌含量：細(xì)菌接種至96孔板中，培養(yǎng)不同時(shí)間后棄去培養(yǎng)液，MTT孵育后DMSO溶解，酶標(biāo)儀測(cè)定比較不同階段efaA+、efaA-菌的OD492值；
　　 4.共聚焦激光掃描顯微鏡觀察比較efaA+、efaA-糞腸球菌所形成的生物膜：各菌株在玻片上形成生物膜，AO/EB染色后CLSM觀察，比較efa

3、A+、efaA-菌所形成生物膜的厚度及生物膜內(nèi)層、中層、外層的細(xì)菌密度和活菌比例，并做統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 5. 采用SYBR GreenⅠ實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)efaA+、efaA-糞腸球菌在細(xì)菌培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)不同時(shí)間后所形成生物膜的efaA mRNA的表達(dá)，與生物膜的厚度變化進(jìn)行對(duì)比。
　　 結(jié)果：
　　 1.腸球菌生物膜黏附期為2h，基本形成期為6h，成熟期為24h，播散期為48h。
　　 2.微量滴

4、定板法比較生物膜形成能力，efaA+糞腸球菌在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的OD570均大于efaA-菌，即efaA+糞腸球菌的生物膜形成能力比efaA-菌的強(qiáng)；
　　 3.MTT法比較生物膜不同階段的活菌含量（OD492），efaA+糞腸球菌在各培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的OD492均大于efaA-菌，即efaA+糞腸球菌所形成的生物膜的活菌數(shù)比efaA-菌的多；
　　 4.共聚焦激光顯微鏡觀察，efaA+糞腸球菌在不同階段所形成的生物膜的厚度、細(xì)菌