低濃度環(huán)丙沙星對體外模型中人大腸桿菌和糞腸球菌敏感性影響研究.pdf

1、殘留在動物可食性組織中的抗菌藥物被人體攝入后可能對人體腸道菌群產(chǎn)生各種不良影響，而環(huán)丙沙星等喹諾酮類藥物應用廣泛，已經(jīng)導致了大量耐藥細菌的產(chǎn)生。該研究利用體外人腸道消化模型，通過振蕩培養(yǎng)人腸道菌模擬低劑量環(huán)丙沙星在人胃腸道的消化過程，同時設立無胃腸消化過程的細菌耐藥性誘導模型，研究環(huán)丙沙星在可食性動物組織中發(fā)生殘留時對人腸道菌耐藥性的影響。腸道消化模型以人體腸道常住條件病原菌為指示菌，大腸桿菌和糞腸球菌標準菌株的細菌接種濃度為105、1

2、06、108CFU/mL，健康志愿者糞便中分離到的大腸桿菌、沙門氏菌敏感菌株細菌接種濃度為106CFU/mL；無胃腸消化過程的模型以大腸桿菌標準菌株、糞腸球菌標準菌株為指示菌，細菌接種濃度為106CFU/mL。各模型環(huán)丙沙星藥物濃度均設0.1μg/mL、0.5μg/mL和2μg/mL三個劑量組和無藥對照組，厭氧振蕩培養(yǎng)一天或連續(xù)七天。采用美國國家臨床試驗室標準委員會推薦的二倍瓊脂稀釋法檢測誘導前后細菌對環(huán)丙沙星、恩諾沙星、青霉素、慶大霉

3、素、四環(huán)素、紅霉素、氨芐青霉素、頭孢氨芐、氯霉素、磺胺二甲嘧啶等十種抗菌藥物敏感性的變化；采用平板稀釋計數(shù)法觀察經(jīng)過一天誘導后細菌數(shù)量的變化；對誘導中產(chǎn)生的對環(huán)丙沙星敏感性下降的菌株，進行聚合酶鏈反應(PCR)擴增GyrA基因(gyrA)的耐藥決定區(qū)，比較耐藥決定區(qū)核苷酸序列，分析耐藥的分子機制。 在胃腸消化模型和無消化模型中，經(jīng)一天誘導后，0.1μg/mL以上環(huán)丙沙星對大腸桿菌、沙門氏菌的生長有明顯的抑制作用，對糞腸球菌生長的

4、抑制作用不顯著。七天誘導后，無消化模型中0.5μg/mL以上環(huán)丙沙星使大腸桿菌或沙門氏菌死亡。胃腸消化模型中2μg/mL環(huán)丙沙星使105和106CFU/mL細菌接種量的大腸桿菌或沙門氏菌死亡。所有劑量組中存活的大腸桿菌、沙門氏菌對環(huán)丙沙星和恩諾沙星都產(chǎn)生耐藥，對其它抗菌藥無耐藥現(xiàn)象。0.1μg/mL以上環(huán)丙沙星對糞腸球菌的藥物敏感性影響仍不顯著。GyrA基因分析發(fā)現(xiàn)耐藥細菌GyrA基因耐藥決定區(qū)核苷酸有突變，并且按核苷酸順序推導出Gyr

5、A亞基第83或87位氨基酸也發(fā)生了改變。以上結果表明：細菌在誘導前對環(huán)丙沙星的敏感性低，誘發(fā)耐藥的可能性??；大腸桿菌、沙門氏菌對環(huán)丙沙星和恩諾沙星耐藥性的產(chǎn)生與誘導的藥物濃度呈正相關，與誘導時間呈正相關，與誘導開始時細菌的接種數(shù)量呈負相關；復雜的腸道環(huán)境能降低環(huán)丙沙星的藥效；誘導的耐藥細菌從分子水平上存在突變。 總之，從耐藥性發(fā)生的程度、菌株和環(huán)境來看，低劑量的環(huán)丙沙星對人體腸道細菌有耐藥選擇作用，由于復雜的環(huán)境能降低環(huán)丙沙星的