三烯丙基三硫醚衍生物對(duì)人前列腺癌PC-3細(xì)胞體外抗腫瘤作用及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)的研究目的是從本實(shí)驗(yàn)室早期合成的一系列新的二烯丙基三硫醚(DATS)衍生物中篩選出能夠有效抑制腫瘤細(xì)胞增殖的化合物，初步探討其可能的作用機(jī)制，為研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的DATS衍生物抗腫瘤新藥奠定基礎(chǔ)。
　　 本實(shí)驗(yàn)以體外培養(yǎng)的人雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞為研究對(duì)象，選取其中五種不飽和的DATS衍生物：二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚、二(3-甲基-2-丁烯基)三硫醚、

2、二(5-己烯基)三硫醚，采用MTT法檢測(cè)研究DATS及其衍生物對(duì)PC-3細(xì)胞增殖抑制作用。采用Hochest33342熒光染色及熒光顯微鏡觀察經(jīng)DATS及其衍生物作用后，人前列腺癌PC-3細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；采用DNA Ladder實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證DATS及其衍生物可誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡；并采用Annexin/PI雙染，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。選取二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫

3、醚三種化合物進(jìn)行抗腫瘤機(jī)制的研究，采用PI單染流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞周期的分布；Western blot檢測(cè)caspase-3及細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和Bax蛋白表達(dá)的影響。
　　 不同濃度DATS及其衍生物處理PC-3細(xì)胞24h、48h后，均可抑制PC-3細(xì)胞體外增殖，抑制率呈明顯的劑量、時(shí)間依賴性；其中二(2-甲基-2-丙烯基)的增殖抑制作用最好，三硫醚二(3-丁烯基)三硫醚和二(4-戊烯基)三硫醚兩種衍生物的增殖抑制作用

4、與DATS相當(dāng)，而二(3-甲基-2-丁烯基)三硫醚和二(5-己烯基)三硫醚的的增殖抑制作用相比于DATS有所減弱。用DATS及其衍生物作用后，Hochest33342染色用熒光顯微鏡觀察PC-3細(xì)胞中出現(xiàn)細(xì)胞核固縮、染色質(zhì)聚集及核裂解等典型凋亡細(xì)胞形態(tài)改變；DNA瓊脂糖凝膠電泳可以觀察到明顯的階梯狀條帶DNA Ladder，說(shuō)明此時(shí)細(xì)胞發(fā)生了凋亡，并且處在晚期凋亡階段。Annexin V/PI雙染流式結(jié)果表明PC-3細(xì)胞經(jīng)過(guò)DATS及其

5、衍生物作用后，細(xì)胞凋亡率與對(duì)照組比較有顯著性升高，證實(shí)DATS及其衍生物能誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞凋亡。流式細(xì)胞周期檢測(cè)顯示，DATS及其DATS及二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-戊烯基)三硫醚三種衍生物可誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞發(fā)生在G2/M期阻滯，Go/G1期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞無(wú)明顯變化。Western blot結(jié)果表明DATS及二(3-丁烯基)三硫醚、二(2-甲基-2-丙烯基)三硫醚、二(4-