糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中結(jié)締組織生長因子的表達(dá)和他汀類-COX-2抑制劑對其的干預(yù)作用.pdf

1、目的:糖尿病是一種世界性的、嚴(yán)重的慢性疾病，而作為其并發(fā)癥的糖尿病視網(wǎng)膜病變(DR)成為發(fā)達(dá)國家中成年人致盲的首要的因素。結(jié)締組織生長因子(CTGF)可以促進(jìn)纖維增殖、細(xì)胞凋亡和血管生成，近年來有學(xué)者開始關(guān)注它在DR發(fā)生中的作用。在臨床上，他汀類降脂藥和COX-2類抑制劑運用非常廣泛，它們在抑制炎癥發(fā)展中都對CTGF的下調(diào)具有明顯的作用。目前國內(nèi)外尚沒有報道它們在眼內(nèi)抑制CTGF表達(dá)的報道。故本實驗擬對這兩類藥物與CTGF的關(guān)系做進(jìn)一步

2、深入研究，希望為DR的發(fā)生和治療提供一些新思路。 方法: 1.將正常雄性Wistar大鼠隨機分為4組，給其中3組大鼠按照60mg/kg的劑量腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)，建立糖尿病動物模型；在已經(jīng)成型的2組動物的飲用水中分別給予氟伐他汀和塞來昔布，治療達(dá)到12周，而另一組糖尿病組大鼠不給任何治療。 2.取一眼視網(wǎng)膜組織抽提RNA、蛋白質(zhì)，另一眼固定后作免疫組織化學(xué)觀察。 3.將RNA反轉(zhuǎn)錄出cDNA。

3、 4.運用普通PCR和real-timePCR方法擴增CTGF基因，并安排β-actin作為內(nèi)對照，比較4組大鼠的CTGF基因水平的表達(dá)差異。 5.運用免疫印跡法來檢測視網(wǎng)膜在蛋白水平上的CTGF表達(dá)差異。 6.使用免疫組織化學(xué)方法來觀察CTGF在眼內(nèi)的分布，并比較4組大鼠的差異。 7.運用ELISA法檢測4組大鼠房水中CTGF的含量。 結(jié)果: 1.運用PCR方法證明，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中CTG

4、F在基因水平上比正常大鼠明顯增高；兩種藥物治療的大鼠中，CTGF的表達(dá)比糖尿病組明顯減少。 2.運用免疫印跡法證明：糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中CTGF在蛋白質(zhì)水平上比正常大鼠明顯增高；以塞來昔布治療的大鼠中，CTGF比糖尿病組明顯減少，差異具有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)意義；氟伐他汀治療的大鼠與糖尿病組相比，無顯著性差異。 3.運用免疫組織化學(xué)方法證明：CTGF主要分布在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)核層。糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中CTGF陽性的細(xì)胞比正常大鼠明顯

5、增多，且著色較深；以塞來昔布和氟伐他汀治療的大鼠中，CTGF陽性的細(xì)胞比糖尿病大鼠明顯減少，且著色較淺。 4.運用ELISA方法證明：糖尿病大鼠房水中CTGF比正常大鼠明顯增高；兩種藥物治療的大鼠中，CTGF則比糖尿病組明顯減少。 結(jié)論:CTGF在眼內(nèi)主要分布在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)核層。使用氟伐他汀和塞來昔布能降低糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中CTGFmRNA的表達(dá)。使用塞來昔布能降低糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中CTGF蛋白質(zhì)的表達(dá)，使用氟伐他汀不能