Izumo的抗生育作用及其與UU的交叉反應(yīng)抗原.pdf

1、精子特異蛋白Izumo定位在頂體內(nèi)膜上，在精子發(fā)生頂體反應(yīng)后暴露于表面。Izumo基因敲除后的雄性小鼠其精子形態(tài)和運(yùn)動(dòng)仍然正常，能穿過(guò)小鼠卵透明帶但是無(wú)法穿過(guò)卵膜，因而完全喪失受精能力。這些結(jié)果提示Izumo在精-卵融合的過(guò)程中起關(guān)鍵作用。 本研究將小鼠Izumo蛋白分成3段(PA、PB、PC)進(jìn)行克隆表達(dá)，其中PB包含Ig-like結(jié)構(gòu)域的全部氨基酸序列；用純化的各重組Izumo分段蛋白分別免疫兔，獲取了特異的、高效價(jià)的多克隆

2、抗體；通過(guò)小鼠體外精-卵融合實(shí)驗(yàn)和小鼠交配實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)小鼠Izumo蛋白的Ig-like結(jié)構(gòu)域有較明顯的抗生育作用，可作為免疫節(jié)育靶抗原的候選者。通過(guò)搜索Swiss-Prot蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)，發(fā)現(xiàn)溶脲脲原體(UU)與人精子蛋白Izumo之間有交叉反應(yīng)抗原。然后通過(guò)Western blot鑒定了ATLTK這五肽為UU474蛋白與人Izumo蛋白Ig-like結(jié)構(gòu)域之間的交叉反應(yīng)抗原；通過(guò)小鼠體外精-卵融合實(shí)驗(yàn)和小鼠交配實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)合成肽Izumo2

3、12-227(包含ATLTK，位于Ig-like結(jié)構(gòu)域)也有較明顯的抗生育作用。推測(cè)Izumo212-227可能是Izumo蛋白Ig-like結(jié)構(gòu)域上B細(xì)胞表位中的一個(gè)。由于人與小鼠Izumo蛋白Ig-like結(jié)構(gòu)域的氨基酸序列保守性很高，同時(shí)已經(jīng)制備了高效價(jià)的抗小鼠Izumo蛋白Ig-like結(jié)構(gòu)域(PB)的抗體，因此我們通過(guò)Western blot來(lái)初步篩選小鼠Izumo蛋白Ig-like結(jié)構(gòu)域的線性B細(xì)胞表位，這些B細(xì)胞表位有望成