棕櫚花蕾水提物的抗生育作用及其機制研究.pdf

1、人口過多和增長過快對國家的經(jīng)濟建設(shè)造成了巨大的威脅,自20世紀70年代我國開始實施計劃生育政策以來,有效的控制了人口的過度膨脹。如何安全、有效的控制人口增長,研制新型節(jié)育藥物和方法一直是生物醫(yī)藥領(lǐng)域研究的熱點和重點之一。
　　《本草綱目》中記載棕櫚加工成碳具有收澀、止血之功效,棕櫚筍及子花有治療崩中帶下的功效?！堵膸f巖本草》記載棕櫚食之破婦人血氣,不作胎孕。本文通過對棕櫚花蕾(Palm Buds,PB)水提物的實驗研究,探討其抗生

2、育作用及其機制,為中醫(yī)藥抗生育提供科學(xué)依據(jù)。
　　目的:探討棕櫚花蕾水提物(Aqueous Extract of Palm Buds,AEPB)對實驗動物的抗生育作用及其可能作用機制。
　　方法:
　　1、AEPB抗生育作用的實驗方法
　　1.1、AEPB的抗著床、抗早孕作用
　　小鼠以雌雄2:1合籠,每天早晨檢查陰道,以陰栓出現(xiàn)日為妊娠第一天。將妊娠小鼠隨機分為5組,即棕櫚花蕾生藥低、中、高不同劑量組(2

3、.5g、5g、10g/kg);米非司酮組;NS組。抗著床實驗在妊娠第1-4天,抗早孕實驗在妊娠第6-9天,各組分別給予不同濃度的AEPB0.1ml/10gig,米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d。于妊娠第12天將小鼠頸椎脫臼處死、解剖,觀察子宮中的胚胎數(shù);取出卵巢、腎上腺、脾臟、胸腺,稱重并計算其臟器指數(shù)。1.2AEPB的避孕作用。
　　將小鼠隨機分為5組,即棕櫚花蕾生藥低、中、高不同劑量組(2.5g

4、、5g、10g/kg);米非司酮組;NS組。各組分別給予不同濃度的AEPB0.1ml/10gig,米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d,連續(xù)3天。將5組小白鼠分別與雄鼠以2:1比例合籠1周,合籠期間每天檢查陰道,交配成功者分別取出分籠飼養(yǎng)、分籠后12天頸椎脫臼處死小白鼠,觀察子宮中有無胚胎。
　　2、AEPB的抗生育作用機制
　　2.1、AEPB對動物子宮平滑肌的影響
　　利用BL-420E

5、生物機能實驗系統(tǒng),觀察測量AEPB對大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率、收縮幅度和活動力的影響。通過浴管內(nèi)直接給藥和十二指腸給藥兩種方法,觀察并測量AEPB對動物在體子宮平滑肌的收縮頻率、幅度、張力和活動力的影響。
　　2.2、AEPB對家兔排卵的影響
　　選取健康成熟未孕雌兔隨機分成5組,即棕櫚花蕾生藥低、中、高不同劑量組(2.5g、5g、10g/kg);米非司酮組;NS組。各組分別給予不同濃度的AEPB0.1ml/10gig,

6、米非司酮10mg/kgih,NS0.1ml/10gig,1次/d,連續(xù)3天。同時,在實驗第1天,給家兔苯甲酸雌二醇(EB)5ug/kgih,1次/d,連續(xù)2天,第3天注射l％硫酸銅溶液0.4ml/kg,誘發(fā)排卵。注射后24小時解剖,檢查兩側(cè)卵巢,記錄排卵點。
　　2.3、AEPB對小鼠體內(nèi)激素水平的影響
　　2.3.1、AEPB抗雌激素活性研究
　　選取體重10g-12g的昆明種雌性小鼠,隨機分為6組,對照組(NS0.

7、4ml/只ig);AEPB組(0.2ml/只和0.4ml/只ig);EB組(1ug/只,ih);EB+AEPB組(1ug/只+0.2ml/只和1ug/只+0.4ml/只),1次/d,連續(xù)3天。在第一次給藥72h后,用分析天平稱取子宮濕重,利用小鼠子宮重量法,計算并比較給藥后各組間小鼠子宮重量的差別。
　　2.3.2、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定AEPB對小鼠雌孕激素水平的影響
　　成年雌性未孕小鼠分別灌胃5g/kg、1

8、0g/kg、20g/kg的AEPB,1次/d,兩周后用ELISA法測定血清中雌、孕激素水平。
　　2.3.3、電化學(xué)發(fā)光全自動免疫分析儀(Elecsys2010)測定AEPB對家兔體內(nèi)激素水平的影響
　　給健康雌性未孕家兔腹腔注射不同劑量的棕櫚花蕾水提物,1次/d,連續(xù)9天。給藥后分別從耳動脈取血,用Elecsys2010儀器測定血清中FT3、FT4、雌二醇、孕酮的含量。
　　3、AEPB的急性毒性實驗
　　將小

9、鼠隨機分為對照組和給藥組,每組20只。根據(jù)最大耐受劑量測定急性毒性實驗法:給藥組給予濃度為1g/ml的AEPB0.4ml/10gig,2次/d,對照組給予等量的NS,連續(xù)7d,密切觀察其一般行為、飲食量和飲水量、出現(xiàn)中毒癥狀及死亡情況,隔日稱一次體重。若有動物死亡,應(yīng)做尸檢。
　　結(jié)果:
　　1、AEPB的抗生育作用
　　低、中、高劑量AEPB使小鼠著床抑制率達60%、90%、100%,對早期妊娠小鼠致流產(chǎn)率分別為25

10、%、66.7%、77.8%,中、高劑量AEPB使小鼠宮腔內(nèi)無胚胎發(fā)育,避孕率達100%。
　　2、AEPB的抗生育作用機制
　　AEPB使大鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率增快、收縮張力提高,并能使動物在體子宮平滑肌的收縮幅度增強;AEPB中、高劑量組對家兔的排卵抑制率分別達46%、100%;ELISA法發(fā)現(xiàn)AEPB可致小鼠體內(nèi)孕酮水平顯著升高;Elecsys2010儀測得AEPB能顯著性降低血中FT3含量、升高孕酮水平。