核桃水提物神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用研究.pdf

1、社會(huì)人口老齡化加重,使老年疾病受到重視,神經(jīng)退行性疾病嚴(yán)重影響患者正常生命活動(dòng),因此解決此類(lèi)問(wèn)題刻不容緩。天然產(chǎn)物類(lèi)藥物有不可替代的優(yōu)勢(shì),其來(lái)源廣泛,結(jié)構(gòu)多樣且安全性高,成為近年來(lái)藥物發(fā)展的新重點(diǎn)。核桃(Juglans regia L)是胡桃科核桃屬多年生落葉喬木,學(xué)名胡桃。在我國(guó)栽培歷史悠久,華北、西北、西南、華中、華南和華東,新疆南部等22個(gè)省份均有大面積種植。核桃中含有豐富的油脂,蛋白質(zhì)多種微量元素。其中含有的亞油酸、亞麻酸、油酸

2、等的活性是近年研究較多的方面。大量文獻(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,不飽和脂肪酸對(duì)降低膽固醇,延緩大腦神經(jīng)的衰老和促進(jìn)神經(jīng)再生意義重大。核桃仁中除了油脂部分具有這樣的活性,水溶性部分是否也有類(lèi)似神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)、神經(jīng)保護(hù)活性是本論文研究的重點(diǎn)。將新鮮核桃去皮后打粉脫脂,脫脂粉加水超聲提取后的水溶液旋蒸干重新用水溶解成2g/mL溶液作為母液,用神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SH-SY5Y)細(xì)胞系構(gòu)建體外神經(jīng)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?以神經(jīng)突觸生長(zhǎng)為評(píng)價(jià)指標(biāo),評(píng)價(jià)核桃水提物的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)作用。進(jìn)

3、而檢測(cè)神經(jīng)絲蛋白(NF160)的基因表達(dá)量和蛋白表達(dá)量是否上調(diào)。得到的主要結(jié)論如下:
　　(1)核桃水提物穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)顯示,水提物在溫度較高時(shí)會(huì)出現(xiàn)降解現(xiàn)象。水提物過(guò)0.22μm水系膜后分別放置于4℃、25℃和37℃溫度下分別處理1d,2d,3d后用高效液相檢測(cè),之后用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件對(duì)色譜峰經(jīng)行分析,結(jié)果顯示37℃放置1d后水提物中有物質(zhì)出現(xiàn)明顯降解現(xiàn)象,25℃中也有此類(lèi)現(xiàn)象出現(xiàn),但在4℃下放置3d并未出現(xiàn)明顯降解情

4、況。調(diào)節(jié)水提物pH為5.5、6.5、7.5、8.5分別處理1h后用液相檢測(cè),中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)軟件結(jié)果顯示并未有明顯差異,故認(rèn)為沒(méi)有明顯降解出現(xiàn)。所以水提物建議存放于4℃以下溫度,以保證樣品不降解。
　　(2)核桃未去皮脫脂粉水提物有明顯細(xì)胞毒性,去皮核桃脫脂粉水提物沒(méi)有明顯細(xì)胞毒性。核桃未去皮脫脂水提物處理細(xì)胞24h后進(jìn)行MTT實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示水提物終濃度在400μg/mL以上出現(xiàn)明顯細(xì)胞毒性。而去皮后的核桃粉水提物MTT

5、實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,水提物終濃度從0.128mg/mL到2000mg/mL之間沒(méi)有明顯細(xì)胞毒性。
　　(3)核桃去皮脫脂水提物有促進(jìn)SH-SY5Y細(xì)胞突觸伸長(zhǎng)的活性,且能夠上調(diào)NF160基因的表達(dá)和蛋白的表達(dá)量。去皮水提物處理細(xì)胞1w后用熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)終濃度為5mg/mL時(shí)細(xì)胞突觸相對(duì)空白對(duì)照組有明顯增長(zhǎng)現(xiàn)象。水提物處理細(xì)胞24h后提取細(xì)胞RNA和蛋白進(jìn)行熒光定量PCR和Westren blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在終濃度5mg/mL時(shí)NF

6、160基因有明顯上調(diào)現(xiàn)象,蛋白表達(dá)量也有顯著提升。核桃水提物促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞突觸伸長(zhǎng)可能跟NF16基因的上調(diào)有關(guān)。
　　(4)結(jié)合文獻(xiàn)及標(biāo)品確定水提物中有己知成分胞苷、尿苷、鳥(niǎo)苷和腺苷。4種物質(zhì)細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示腺苷終濃度在0.2μg/mL以上有細(xì)胞毒性,除此之外其他3種核苷并無(wú)明顯細(xì)胞毒性。該4種核苷按原始比例混合后處理細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,并無(wú)明顯毒性。4種核苷處理細(xì)胞1w后用顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)胞苷、尿苷和鳥(niǎo)苷均有促進(jìn)細(xì)胞突觸