神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護活性物質(zhì)篩選研究.pdf

1、目的：構建有效便捷的細胞模型篩選具有神經(jīng)營養(yǎng)和(或)神經(jīng)損傷保護的活性物質(zhì)。利用所建模型對部分貴州中藥及民族藥粗提物及化合物進行神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護活性篩選，尋找具有神經(jīng)營養(yǎng)和(或)神經(jīng)損傷保護的活性物質(zhì)，為進一步開展對貴州中藥及民族藥進行神經(jīng)營養(yǎng)和神經(jīng)損傷保護活性物質(zhì)研究提供方法學保障和實踐經(jīng)驗。 研究方法：大鼠腎上腺嗜鉻細胞瘤細胞(rat pheochromocytoma cells, PC12)具有較高的穩(wěn)定性和同質(zhì)性，

2、分化程度高，對神經(jīng)生長因子(Nerve Growth Factor，NGF)有較強的反應，生長出神經(jīng)突起，被廣泛應用于有關神經(jīng)細胞分化和功能的各種研究。本工作利用PC12以上特點構建以下細胞模型1)促神經(jīng)細胞分化小分子活性物質(zhì)的篩選模型，2)抗過氧化氫損傷PC12細胞模型，3)抗β-淀粉肽損傷PC12細胞模型，4)抗谷氨酸損傷PC12細胞模型。通過考察不同的細胞密度、損傷物質(zhì)的濃度、及損傷物質(zhì)的作用時間等方面對PC12細胞的影響，選擇合

3、適的實驗條件。通過對模型條件的優(yōu)化為開展大規(guī)模樣品篩選提供簡便有效的方法。篩選實驗前先通過MTT法評價各樣品在預設濃度下對PC12細胞生長的抑制程度，再通過過氧化氫、β-淀粉肽、谷氨酸致PC12細胞損傷模型評價樣品對過氧化氫、β-淀粉肽、谷氨酸損傷的抑制作用，有利于對樣品的活性作出全面、客觀、準確的評價及篩選出有效低毒的活性物質(zhì)。 結果：本工作成功復制促神經(jīng)細胞分化小分子活性物質(zhì)的篩選模型、抗過氧化氫損傷PC12細胞模型、抗β-

4、淀粉肽損傷PC12細胞模型、抗谷氨酸損傷PC12細胞模型。通過對實驗條件的優(yōu)化確定了模型條件。利用所建模型對314個樣品進行了促神經(jīng)細胞分化活性篩選，篩選出37個活性樣品；對205個樣品進行了 抗過氧化氫損傷PC12細胞活性篩選，篩選出149個活性樣品；對35個樣品進行了抗β-淀粉肽損傷PC12細胞活性篩選，篩選出17個活性樣品；對34個樣品進行了抗谷氨酸損傷PC12細胞活性篩選，篩選出27個活性樣品。 結論：所構建模型