二甲雙胍對2型糖尿病大鼠血清和胰腺骨鈣素影響的實驗研究.pdf

1、目的
　　 采用高脂飼料結(jié)合小劑量STZ一次性腹腔注射誘導(dǎo)正常的SD大鼠發(fā)生2型糖尿病(T2DM)，制造一種符合人類T2DM發(fā)病特點的動物模型，用放射免疫法檢測各組大鼠BGP水平、免疫組化方法檢測大鼠胰腺BGP的含量，同時檢測各組大鼠血糖、血脂、胰島素，并用二甲雙胍干預(yù)，綜合分析二甲雙胍干預(yù)下BGP水平與糖脂代謝的關(guān)系，探討B(tài)PG對胰島B細胞增殖、胰島素分泌、胰島素敏感性、脂代謝的影響，為T2DM臨床的防治提出更新、更可靠的理論

2、依據(jù)。
　　 方法
　　 適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將36只重約180-230g大鼠按隨機分為3組，每組12只，分別為正常對照組(A組)，T2DM大鼠非干預(yù)組(B組)，T2DM大鼠二甲雙胍干預(yù)組(C組)，B、C組用高脂飼料喂養(yǎng)。第8周末，3組大鼠禁食不禁水12h，然后B、C組大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素25mg/kg，A組注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液作對照。第10周末行OGTT篩選成模大鼠。OGTT篩選成模大鼠后，C組給于二甲雙胍100

3、mg.kg-1.d-1灌胃4周，A、B組給于相同體積的蒸餾水灌胃。在實驗第4、8、10、14周末分別取大鼠血清，酶法檢測甘油三脂(TG)、總膽固醇(TC)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、葡萄糖氧化法檢測空腹血糖(FPG)，放射免疫法檢測骨鈣素(BGP)和空腹胰島素(FINS)。第14周末處死所有大鼠，取出胰腺和內(nèi)臟脂肪組織，用電子天平稱量內(nèi)臟脂肪并計算體脂比；胰腺組織用HE染色并在光鏡下觀察病理改變，用免疫組織化學(xué)SP法檢測胰腺組織

4、BGP的情況。
　　 結(jié)果
　　 1.B、C組大鼠腹腔注射STZ3天后，即出現(xiàn)多尿、多飲、多食等癥狀，OGTT結(jié)果顯示B、C各時點血糖水平均高于A組，達到糖尿病成模標準，而A組各時點未達到成模標準。
　　 2.第4周末B、C組經(jīng)高脂喂養(yǎng)后體重增長，顯著高于A組，第8周末體重增長最為顯著，出現(xiàn)明顯的腹型肥胖。第8周注射STZ后B、C組大鼠均先出現(xiàn)體重大幅度下降，然后緩慢有所回升，但至實驗結(jié)束時其體重均小于A組。第4

5、周末TG出現(xiàn)升高(P<0.001)，第8周末TG、TC、FINS均高于A組(P<0.001)，而HDL-C和胰島素敏感指數(shù)(ISI)均明顯低于A組(P<0.001)，至14周更加顯著，但C組與B組比較，TG、TC、FINS均出現(xiàn)不同程度下降(P<0.05)，而ISI出現(xiàn)不同程度升高(P<0.05)。
　　 3.第4周末，高脂喂養(yǎng)的B、C兩組與A組相比，血清BGP均有輕度升高，但差異無有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。第8周末，B、C

6、兩組血清BGP與A組相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，B、C之間相比無明顯差異(P>0.05)。第10周末，B、C組血清BGP與A組相比，BGP均顯著性下降(P<0.001)。第14周未，C組大鼠血清BGP有所上升，F(xiàn)PG下降，F(xiàn)INS和ISI上升，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05或P<0.001)。未經(jīng)干預(yù)的A、B組血清BGP，與第10周同組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　 4.大鼠胰腺HE染色結(jié)果。

7、　　 B組：胰島變小，分布較彌散，部分胰島排列不規(guī)則，結(jié)構(gòu)不清，形狀不規(guī)則，胰島細胞數(shù)量減少，部分細胞可見細胞核固縮。
　　 C組：胰島大小不一，形狀偶可見不規(guī)則，界限稍模糊，胰島細胞數(shù)量介于A、B之間。
　　 5.第14周各組大鼠胰腺細胞BGP含量均有差異(P<0.05)，與A組比較，B、C組含量均顯著減少(P<0.001)，B、C組胰腺含量之間比較，C組較高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 6.免

8、疫組織化學(xué)染色結(jié)果：BGP與胰島細胞核特異性抗體結(jié)合后呈棕黃色顆粒。胰腺的外分泌部管腔中亦可見淡棕黃色的顆粒。
　　 A組：低倍鏡下胰島細胞豐富，多為圓形或橢圓形，大小不一，形態(tài)完整，棕黃色顆粒含量豐富。高倍鏡下細胞界限清晰，呈免疫反應(yīng)陽性的棕黃色胰島素顆粒均勻分布在細胞核內(nèi)，顆粒含量豐富，胞核居中，著色深。
　　 B組：低倍鏡下胰島細胞少見，形態(tài)不規(guī)則，邊緣不整齊，棕黃色顆粒含量少；高倍鏡下細胞界限不清晰，胞核呈偏心分

9、布，棕黃色顆粒含量少，著色淺。
　　 C組：低倍鏡下胰島形態(tài)基本正常，邊緣尚完整，棕黃色顆粒含量介于A、B組之間；高倍鏡下細胞界限基本清晰，部分胞核呈偏心分布，著色程度介于A、B組之間。
　　 7.Pearson直線相關(guān)分析顯示，血清BGP水平和胰腺BGP含量與FPG、TG、TC呈負相關(guān)(P<0.05)，與FINS、HDL-C呈正相關(guān)(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.實驗SD大鼠經(jīng)高脂飼料喂養(yǎng)8周

10、后，雖然FPG正常，但ISI下降，提示存在胰島素抵抗，注射小劑量STZ，損傷部分胰腺，成功誘發(fā)T2DM模型。
　　 2.T2DM大鼠血清BGP與胰腺BGP含量顯著低于對照組，與FINS、HDL-C成正相關(guān)，并與FPG、TG、TC成負相關(guān)。表明BGP參與糖脂代謝過程，與T2DM發(fā)病有關(guān)。
　　 3.骨骼分泌的BGP在胰島細胞中呈陽性，以β細胞更為顯著，提示其有促進胰島β細胞增殖，分泌胰島素的作用。
　　 4.二甲雙