槲皮素對(duì)2型糖尿病大鼠血清和胰腺M(fèi)MP-9、TIMP-1影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 本研究采用長(zhǎng)期高脂飼料喂養(yǎng)使正常SD(Sprague-Dawley)大鼠發(fā)生胰島素抵抗(IR)，再結(jié)合低劑量鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)一次性腹腔注射，誘導(dǎo)發(fā)生2型糖尿病(T2DM)，建立一種符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的動(dòng)物模型。檢測(cè)各組大鼠血清和胰腺M(fèi)MP-9、TIMP-1水平，同時(shí)檢測(cè)各組大鼠血清C反應(yīng)蛋白(CRP)和血糖、血脂、胰島素等代謝相關(guān)指標(biāo)，并采用不同劑量的槲皮素進(jìn)行干預(yù)，綜合分析

2、槲皮素干預(yù)下MMP-9、TIMP-1水平變化及其與血糖、血脂、胰島素、CRP等的關(guān)系，進(jìn)一步探討T2DM與MMP-9、TIMP-1的關(guān)系，以及證實(shí)槲皮素具有調(diào)脂、減輕炎癥、提高胰島素敏感性和降低MMP-9、TIMP-1水平的作用，為傳統(tǒng)中藥的研發(fā)、應(yīng)用提供科學(xué)理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 健康清潔級(jí)雄性SD大鼠46只，體重180-230g，在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按完全隨機(jī)法分為A、B、C、D共4組，A組10只即正常對(duì)照組

3、，用普通飼料喂養(yǎng)；B、C、D每組各12只，B組即糖尿病非干預(yù)組，C組為低劑量槲皮素干預(yù)組，D組為高劑量槲皮素干預(yù)組，三組均用高脂飼料喂養(yǎng)。第8周末所有大鼠禁食12小時(shí)后，B、C、D三組按25mg/kg腹腔注射無(wú)菌STZ溶液，A組腹腔注射相應(yīng)體積的無(wú)菌檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH4.4)。第10周末，以口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)顯示血糖峰值≥16.7mmol/L，或者糖負(fù)荷后兩小時(shí)血糖(2hPG)≥11.1mmol/L作為糖尿病大鼠成

4、模標(biāo)準(zhǔn)，篩選糖尿病大鼠。大鼠成模后，C組大鼠給予槲皮素50mg/kg每天灌胃一次，D組大鼠給予槲皮素100mg/kg每天灌胃一次，A、B組給予相應(yīng)體積的蒸餾水灌胃，干預(yù)時(shí)間為4周。在實(shí)驗(yàn)第4、8、14周末分別取大鼠血清，用酶法檢測(cè)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，用葡萄糖氧化酶法檢測(cè)空腹血糖(FPG)，放射免疫法檢測(cè)空腹胰島素(FINS)，速率散射比濁法檢測(cè)CRP，ELISA法檢測(cè)血清MMP-9和TI

5、MP-1。第14周末處死所有大鼠，取出胰腺和內(nèi)臟脂肪組織，用電子天平計(jì)算內(nèi)臟脂肪相對(duì)重量并計(jì)算體脂比；胰腺組織用HE染色并在光鏡下觀察病理改變，用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)胰腺組織MMP-9、TIMP-1表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.B、C、D三組大鼠在注射小劑量STZ后，出現(xiàn)明顯的多飲、多尿等癥狀，OGTT結(jié)果顯示其血糖水平在0h、0.5h、1h、2h四個(gè)時(shí)間點(diǎn)均高于A組(P<0.001)，且達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)，而A組大鼠

6、在四個(gè)時(shí)間點(diǎn)血糖均未達(dá)到成模標(biāo)準(zhǔn)。
　　 2.高脂喂養(yǎng)的B、C、D三組大鼠體重增幅大，在第8周末最為顯著的高于A組，注射STZ后體重出現(xiàn)明顯下降，隨后又緩慢有所回升，但至14周末其體重均顯著低于A組大鼠，而其內(nèi)臟脂肪相對(duì)重量和體脂比均高于A組。在第4周末B、C、D組大鼠血清TG、TC和CRP已經(jīng)出現(xiàn)升高(P<0.05或0.001)；第8周末，三組大鼠血清TG、TC、CRP、FINS均明顯高于A組(P<0.001)，而血清HDL-

7、C和胰島素敏感指數(shù)(ISI)均明顯低于A組(P<0.05或0.001)，至第14周末此變化更加顯著，但槲皮素干預(yù)下的C、D兩組與B組相比，TG、TC、FINS、CRP出現(xiàn)不同程度的下降(P<0.05或0.001)，而HDL-C、ISI出現(xiàn)不同程度的升高(P<0.05或0.001)，并存在一定的劑量依存關(guān)系。
　　 3.B、C、D三組大鼠血清MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1在第8周末升高，并在T2DM造模成功后升

8、高更加顯著，但槲皮素干預(yù)下的C、D兩組與B組相比MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1出現(xiàn)明顯下降(P<0.001)，并存在劑量依存關(guān)系。
　　 4.T2DM大鼠胰腺HE染色結(jié)果：第14周末，胰島變小，分布稀疏，部分胰島排列不規(guī)則，結(jié)構(gòu)相對(duì)不清，胰島細(xì)胞數(shù)量減少，部分細(xì)胞可見(jiàn)腫脹，有的胰島細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮，胰腺外分泌腺結(jié)構(gòu)正常；光鏡下觀察B、C、D各組之間胰島病理改變未見(jiàn)明顯差異。
　　 5.B、C、D三組

9、大鼠胰腺M(fèi)MP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1與A組相比顯著升高(P<0.001)，但槲皮素干預(yù)下的C、D兩組與B組相比MMP-9、TIMP-1、MMP-9/TIMP-1出現(xiàn)不同程度下降(P<0.05或0.001)，并存在劑量依存關(guān)系。
　　 6.Pearson直線相關(guān)分析顯示，血清和胰腺M(fèi)MP-9和TIMP-1水平，以及兩者比值MMP-9/TIMP-1，均與血清TG、TC、FPG、FINS、CRP呈正相關(guān)，而與HD

10、L-C和ISI呈負(fù)相關(guān)。并且MMP-9與TIMP-1之間，MMP-9/TIMP-1與MMP-9、TIMP-1之間，均呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過(guò)高脂喂養(yǎng)加小劑量STZ一次腹腔注射，能在無(wú)糖尿病遺傳背景的SD大鼠中復(fù)制出符合人類T2DM發(fā)病特點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，且方法簡(jiǎn)單易行，成模率高。
　　 2.T2DM大鼠血清與胰腺M(fèi)MP-9、TIMP-1水平及其比值MMP-9/TIMP-1顯著高于正常對(duì)照組，并與血

11、清TG、TC、FPG、FINS、CRP成正相關(guān)，與HDL-C和ISI呈負(fù)相關(guān)，表明脂代謝紊亂、高血糖、高胰島素血癥、胰島素抵抗、炎癥是誘發(fā)MMP-9、TIMP-1和MMP-9/TIMP-1升高的因素。
　　 3.槲皮素可以降低T2DM大鼠血清TG、TC、FINS、CRP，升高HDL-C和ISI，具有調(diào)脂、抗炎、增加胰島素敏感性作用，而且存在一定的劑量依存關(guān)系。
　　 4.槲皮素可降低T2DM大鼠血清與胰腺M(fèi)MP-9、TI