基于MMP-9及TIMP-1對多器官功能損傷的實驗研究.pdf

1、目的：
　　研究MODS條件下MMP-9和TIMP-1表達水平的改變與血管內(nèi)皮損傷之間的關(guān)系，探索通過抑制MMP-9治療MODS的新方法。
　　方法：
　　(1)采用盲腸結(jié)扎穿孔法(CLP)構(gòu)建MODS大鼠模型，檢測各組大鼠肺、肝、腎、小腸功能變化，HE染色觀察各受累組織形態(tài)學改變，ELISA檢測各組血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1含量的變化，RT-PCR和免疫組化檢測各組織MMP-9及TIMP-

2、1表達的變化，免疫熒光法及Western blot檢測各組織IV-C表達的變化。
　　(2)復制膿毒癥內(nèi)皮細胞損傷模型并采用siRNA干擾技術(shù)抑制TIMP-1基因的表達，MTT實驗檢測內(nèi)皮細胞存活率，ELISA和Transwell實驗分析內(nèi)皮細胞分泌MMP-9和TIMP-1的能力，Western blot檢測內(nèi)皮細胞MMP-9、TIMP-1、IV-C及TM表達的變化。
　　結(jié)果：
　　(1)成功復制MODS大鼠模型：對

3、照組各組織結(jié)構(gòu)正常，模型組表現(xiàn)為不同程度的肺、肝、腎、小腸組織損傷。
　　(2)ELISA檢測血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1含量的變化：與對照組比較，模型組血清中TNF-ɑ、IL-1β、MMP-9及TIMP-1的含量均明顯升高。
　　(3)RT-PCR和免疫組化檢測各組織MMP-9及TIMP-1表達的變化：與對照組比較，模型組肺、肝、腎、小腸組織中MMP-9及TIMP-1的表達均明顯升高。
　　

4、(4)免疫熒光法及Western blot檢測各組織中IV-C表達的變化：與對照組比較，模型組肺、肝、腎、小腸組織中IV-C的表達均明顯降低。
　　(5)MTT實驗結(jié)果表明：與對照組比較，膿毒癥組內(nèi)皮細胞相對存活率明顯降低；與膿毒癥組比較，TIMP-1 siRNA組內(nèi)皮細胞相對存活率明顯降低。
　　(6)ELISA檢測內(nèi)皮細胞分泌MMP-9和TIMP-1含量的變化：膿毒癥血清干預后，內(nèi)皮細胞釋放MMP-9及TIMP-1的含量

5、明顯升高。
　　(7)Western blot檢測內(nèi)皮細胞MMP-9、TIMP-1、IV-C及TM的表達結(jié)果顯示，與對照組比較，膿毒癥組內(nèi)皮細胞TM及IV-C的表達量減少，MMP-9及TIMP-1的表達量增加；與膿毒癥組比較，TIMP-1 siRNA組內(nèi)皮細胞TM及IV-C的表達量減少，MMP-9的表達量增高。
　　(8)Transwell實驗結(jié)果表明：與對照組比較，膿毒癥組穿過基質(zhì)膠的細胞數(shù)量明顯增多；與膿毒癥組比較，TI