2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)是一種特殊的間質(zhì)細(xì)胞,近來已證實ICC為胃腸道慢波的起搏器,并參與慢波的傳導(dǎo),在神經(jīng)肌肉信號傳遞中也起重要調(diào)節(jié)作用。慢波又稱為基本電節(jié)律,決定著胃腸道平滑肌收縮節(jié)律,慢波活動的異常必然會引起胃腸運動功能的紊亂。因此,ICC的異常將會導(dǎo)致胃腸運動紊亂。業(yè)已證明嬰幼兒肥厚性幽門狹窄、Hirschsprung's病、慢傳輸性便秘、慢性假性腸梗阻等眾多胃腸動力紊亂性疾病都存在ICC缺失或缺陷。 隨著IC

2、C表達(dá)c-kit的發(fā)現(xiàn),為ICC的研究帶來了巨大的進(jìn)展。隨后,人們意識到c-kit與其配體干細(xì)胞因子(stemcellfactor,SCF)結(jié)合所啟動的信號途徑對ICC的發(fā)生、發(fā)育及表型維持至關(guān)重要,SCF/c-kit信號途徑異常是引起ICC缺失及慢波消失的主要原因。ICC具有可塑性的特點,ICC缺失后有恢復(fù)正常的可能。那么從恢復(fù)SCF/c-kit信號途徑入手則有望促使ICC恢復(fù)。但目前尚未見相關(guān)研究報道。 為此,本實驗將從IC

3、C入手,建立一種ICC缺失模型,并觀察SCF促使其恢復(fù)的作用,可望拓展ICC和胃腸動力研究領(lǐng)域,并將為胃腸運動紊亂的治療提供新思路。 目的:1.觀察Balb/c小鼠小腸中ICC的形態(tài)特征以及小腸在體慢波活動情況; 2.通過阻斷c-kit受體的作用來建立小鼠小腸ICC缺失模型并初步探討其發(fā)生機(jī)制; 3.從小腸肌條離體培養(yǎng)層面觀察SCF促進(jìn)缺失的ICC恢復(fù)作用; 4.從在體動物層面觀察SCF促進(jìn)缺失的ICC恢

4、復(fù)作用。 方法:1.選取成年Balb/c小鼠,記錄小腸在體慢波活動情況,并采用免疫組化法觀察ICC的分布及形態(tài)特征; 2.選取新出生Balb/c小鼠,腹腔內(nèi)隔天注射c-kit抗體(ACK2)100μg,共5次,對照組注射生理鹽水,于10d后測定小腸慢波,并通過免疫組化法及透射電鏡觀察小腸Caial間質(zhì)細(xì)胞的分布與形態(tài)特征,采用RT-PCR、WesternBlot法檢測c-kit基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況,采用TUNEL染色方法檢

5、測原位細(xì)胞凋亡; 3.取ICC缺失模型小鼠小腸肌條離體培養(yǎng),觀察SCF0ng/ml、50ng/ml及100ng/ml三種不同濃度培養(yǎng)1d、3d及5d對小腸肌條慢波活動的影響;選取最佳SCF濃度及培養(yǎng)時相點,采用免疫組化法觀察ICC的分布及形態(tài)特征,采用RT-PCR、WesternBlot法檢測c-kit基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況; 4.取ICC缺失模型小鼠,根據(jù)SCF臨床應(yīng)用劑量,腹腔注射SCF30μg/kg·d,連續(xù)注射5d后

6、觀察小腸在體慢波活動及Cajal間質(zhì)細(xì)胞分布、c-kit表達(dá)情況。 結(jié)果:1.成年Balb/c小鼠小腸在體慢波表現(xiàn)為不規(guī)則的近似正弦波樣曲線;慢波頻率為17.78士1.52次/min,頻率變異系數(shù)為8.55%,慢波振幅為0.16mV±0.02mV,振幅變異系數(shù)為14.11%; 2.免疫組化顯示ICC主要分布在小腸肌間神經(jīng)叢區(qū)(稱為ICC-MY)以及環(huán)肌層的深肌層叢區(qū)(稱為ICC-DMP),ICC-MY在切面上呈連續(xù)性分布

7、條帶; 3.10d大小的對照組小鼠小腸在體慢波及ICC的分布情況均類似于成年小鼠。而ACK2處理的實驗組小鼠小腸在體慢波活動無節(jié)律,頻率與振幅均較低,頻率為2.38士0.89次/min,振幅為0.045mV±0.012mV,與對照組存在著顯著差異(p<0.01);并且ICC缺失,未能檢測到c-kitmRNA以及c-kit蛋白的表達(dá); 4.原位細(xì)胞凋亡檢測顯示,ACK2處理的實驗組小腸粘膜層和粘膜下層均見明顯的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象

8、,但肌間神經(jīng)叢區(qū)卻未見明顯細(xì)胞凋亡; 5.超微結(jié)構(gòu)觀察顯示ACK2處理的實驗組未見典型的ICC,也未見明顯的壞死細(xì)胞和凋亡小體,偶可見到一種類似于ICC的細(xì)胞,但其內(nèi)線粒體數(shù)量明顯減少; 6.將ICC缺失小鼠小腸肌條行離體培養(yǎng),結(jié)果顯示SCF50ng/ml作用5d可使小腸肌條慢波頻率明顯加快;SCF100ng/ml作用3d就可使小腸肌條慢波頻率明顯加快,但作用5d時則更顯著,且振幅也加大(p<0.05,與SCF0ng/m

9、l比較); 7.SCF100ng/ml作用于ICC缺失小鼠離體培養(yǎng)的小腸肌條5d后,可在肌間神經(jīng)叢區(qū)觀察到ICC,但其分布不完整;SCF作用后c-kitmRNA及c-kit蛋白表達(dá)也增強(qiáng)(p<0.05,與SCF0ng/ml比較),卻仍明顯低于正常對照組; 8.SCF腹腔注射給藥可使ICC缺失小鼠小腸在體慢波頻率明顯增快(p<0.01,與NS給藥組比較),振幅也有加大(p<0.05,與NS給藥組比較);SCF作用后可在肌間

10、神經(jīng)叢區(qū)觀察到ICC,但其分布不完整,并且c-kitmRNA及c-kit蛋白表達(dá)也增強(qiáng)(p<0.05,與NS給藥組比較),卻仍明顯低于正常對照組。 結(jié)論:1.Balb/c小鼠小腸ICC主要分布著ICC-MY及ICC-DMP兩類,為雙極或多極細(xì)胞,ICC-MY相互連接成網(wǎng)絡(luò)狀,與平滑肌細(xì)胞及神經(jīng)元關(guān)系密切; 2.阻斷c-kit可導(dǎo)致ICC缺失及慢波消失,并且ICC的缺失很可能是因為發(fā)生了表型轉(zhuǎn)變而不是凋亡或壞死;

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