便秘型腸易激綜合征模型大鼠腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞的研究.pdf

1、【背景與目的】腸易激綜合征(IBS)是常見的功能性腸病，發(fā)病機制尚不清楚。由于在人體取材研究非常困難，因此建立IBS動物模型，對于探討IBS的發(fā)病機制具有重要意義。本研究在已建立的C-IBS大鼠模型基礎(chǔ)上，重復(fù)驗證和完善該模型，使之具有較好的模擬性、重復(fù)性和穩(wěn)定性；同時研究該模型大鼠腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(ICC)、肥大細(xì)胞(MC)和5-羥色胺(5-HT)的變化，為IBS的發(fā)病機制提供新的線索和依據(jù)。 【方法】Wistar大鼠5

2、6只，雌雄各半，隨機分為3組。A組24只，冰水灌胃4周，又分為A1、A2、A3組，每組8只，分別于灌胃結(jié)束后即刻、2周、4周停止觀察。B組8只，冰水灌胃2周，于灌胃結(jié)束4周停止觀察。C組24只，為正常對照組，正常飼養(yǎng)不灌胃，又分為C1、C2、C3兩組，每組8只，分別觀察4周、6周和8周。主要觀察A、B和C3組大鼠每天糞便粒數(shù)及含水量的變化。在觀察結(jié)束后，對A組和C組大鼠進行直結(jié)腸擴張，并應(yīng)用腹部撤離反射(AWR)評分，評價腸道敏感性。應(yīng)

3、用甲苯胺藍染色研究A、C組大鼠回盲部和結(jié)腸的MC計數(shù)，應(yīng)用免疫組化染色法研究5-HT在腸道的表達。對A、C組大鼠的小腸、回盲部及結(jié)腸肌層，我們應(yīng)用免疫組化染色法研究c-kit陽性ICC的表達，應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)方法研究c-kit基因mRNA的表達，應(yīng)用透射電鏡研究ICC的超微結(jié)構(gòu)。 【結(jié)果】A組大鼠冰水灌胃后第2-8周與C3組大鼠相比，24h糞便粒數(shù)明顯減少(P＜0.05)，含水量明顯降低(P＜0.05)。B組大鼠冰水灌胃后

4、第2-4周與C3組大鼠相比，24h糞便粒數(shù)明顯減少(P＜0.05)，含水量明顯降低(P＜0.05)。以后有所上升，糞便含水量于第5周與C3組相比已無顯著差異(P＞0.05)，糞便粒數(shù)至第6周仍明顯低于C3組大鼠(P＜0.05)。 造模時間對大鼠腸道敏感性無明顯影響(P＞0.05)。冰水灌胃對大鼠痛覺敏感容量閾值和痛覺最大耐受容量閾值有顯著影響(P＜0.05)。A組大鼠痛覺敏感容量閾值為1.07±0.19ml明顯高于C組大鼠0.9

5、1±0.16ml(P＜0.05)。A組大鼠痛覺最大耐受容量閾值為1.77±0.21ml明顯高于C組大鼠1.58±0.23ml(P＜0.05)。在AWR評分1-4分中，雌性大鼠的容量閾值依次為0.61±0.10ml、0.91±0.16ml、1.26±0.19ml、1.57±0.20ml，與雄性大鼠0.76±0.17ml、1.09±0.19ml、1.45±0.23ml、1.78±0.23ml相比，均明顯降低(P＜0.05)；A組雌性大鼠的容

6、量閾值依次為0.65±0.10ml、0.98±0.16ml、1.37±0.15ml、1.65±0.19ml，與雄性大鼠0.81±0.20ml、1.20±0.15ml、1.59±0.16ml、1.91±0.13ml相比，均明顯降低(P＜0.05)。C組雌性大鼠的容量閾值與C組雄性大鼠相比無顯著差異(P＞0.05)。 與C組相比，A組大鼠回盲部和結(jié)腸MC計數(shù)顯著增多(P＜0.05)，5-HT陽性表達顯著增強(P＜0.05)。A組大鼠

7、小腸肌層c-kit陽性ICC的積分光密度(IOD)和陽性面積與C組相比均顯著增高(P＜0.05)，光密度無顯著差異(P＞0.05)；A組大鼠結(jié)腸肌層c-kit陽性ICC的光密度、積分光密度(IOD)和陽性面積與C組相比均顯著增高(P＜0.05)；A組大鼠回盲部肌層c-kit陽性ICC與C組相比無顯著差異(P＞0.05)。A組大鼠小腸和結(jié)腸肌層c-kit基因mRNA的IOD比值與C組相比均顯著降低(P＜0.05)。電鏡下，A組大鼠小腸和結(jié)