Inos與Cajal間質(zhì)細(xì)胞在術(shù)后腸梗阻大鼠小腸的變化及作用研究.pdf

1、背景：術(shù)后腸梗阻(postoperative ileus，POI)是一種手術(shù)后常見的胃腸動(dòng)力障礙性疾病，持續(xù)時(shí)間長短不一，嚴(yán)重影響著患者術(shù)后的康復(fù)速度。POI的發(fā)生與麻醉、手術(shù)創(chuàng)傷、應(yīng)激、藥物及術(shù)后疼痛等多種因素有關(guān)，但詳細(xì)的病理生理機(jī)制尚不完全清楚。近年的研究發(fā)現(xiàn)術(shù)后胃腸道炎癥反應(yīng)，尤其是炎性介質(zhì)的作用，對POI的持續(xù)存在起著關(guān)鍵性作用。
　　 研究發(fā)現(xiàn)，胃腸壁內(nèi)巨噬細(xì)胞上調(diào)誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(inducible nitric

2、 oxide，iNOS)表達(dá)，產(chǎn)生大量的一氧化氮(nitric oxide，NO)，與POI胃腸動(dòng)力異常的發(fā)生有關(guān)。NO是腸神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)之一，在胃腸道動(dòng)力調(diào)控中起著重要作用。NO和可溶性鳥苷酸環(huán)化酶(soluble guanylate cyclase，sGC)結(jié)合后導(dǎo)致cGMP升高，可產(chǎn)生一系列生物效應(yīng)。最近的研究發(fā)現(xiàn)，胃腸道Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitial cells ofCajal，ICC)幾乎都呈s

3、GC免疫反應(yīng)陽性，提示ICC是NO作用的靶細(xì)胞之一。
　　 ICC是胃腸道慢波的起搏細(xì)胞，并以網(wǎng)絡(luò)狀的結(jié)構(gòu)廣泛分布于胃腸道。它介于腸神經(jīng)系統(tǒng)(enteric nervous system，ENS)和平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells，SMC)之間，參與腸神經(jīng)信號的傳遞，對胃腸道運(yùn)動(dòng)功能起著重要的調(diào)控作用。研究發(fā)現(xiàn)，在潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病等多種炎性腸病中，均存在胃腸ICC減少或形態(tài)異常的現(xiàn)象；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)機(jī)械性

4、腸梗阻近端腸壁內(nèi)ICC數(shù)量異常減少。然而在POI時(shí)，腸壁內(nèi)ICC發(fā)生了怎樣的改變？迄今未見報(bào)道。它與異常增高的iNOS是否存在關(guān)聯(lián)值得探討。
　　 基于上述研究背景，我們推測腸壁內(nèi)過量的NO可能導(dǎo)致ICC形態(tài)或數(shù)量異常在POI的發(fā)生中發(fā)揮了重要作用，阻斷NO信號作用途徑可能減輕ICC受損，從而達(dá)到防治POI的目的。
　　 目的：建立POI大鼠模型，檢測其胃腸傳輸功能及小腸iNOS、ICC分布和表達(dá)的變化；進(jìn)一步觀察iNO

5、S抑制劑對POI大鼠小腸ICC和胃腸傳輸功能的影響，探討iNOS/ICC在POI發(fā)生中的作用。
　　 方法：
　　 1.建立POI大鼠模型，檢測大鼠的胃腸傳輸功能。
　　 2.免疫組化觀察小腸iNOS、c-kit(ICC的特異性標(biāo)志物)免疫反應(yīng)陽性分布；Real time RT-PCR檢測iNOS、c-kit mRNA表達(dá)。
　　 3.觀察應(yīng)用iNOS抑制劑后，POI大鼠胃腸傳輸功能的變化；免疫組織化學(xué)染

6、色觀察iNOS、c-kit的免疫反應(yīng)陽性分布變化；Real time RT-PCR檢測iNOS、c-kit mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.胃腸傳輸功能測定顯示POI模型組大鼠胃腸傳輸速率較對照組顯著降低(P<0.05)。
　　 2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果，對照組大鼠小腸iNOS免疫反應(yīng)陽性表達(dá)呈陰性，而POI模型組大鼠小腸iNOS免疫反應(yīng)陽性表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05)，主要分布在粘膜層及粘膜下層。

7、對照組大鼠小腸c-kit陽性細(xì)胞廣泛分布在環(huán)肌層和縱肌層、肌間神經(jīng)叢以及粘膜下層。與對照組相比，POI模型組大鼠小腸c-kit陽性表達(dá)顯著減弱(P<0.05)。
　　 3.Real time RT-PCR結(jié)果，與對照組比較，POI模型組大鼠小腸iNOS mRNA表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05)，而c-kit mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)。
　　 4.應(yīng)用iNOS抑制劑后，與POI模型組相比，iNOS抑制劑干預(yù)組大鼠胃

8、腸傳輸速率顯著增加(P<0.05)；免疫組化結(jié)果顯示，iNOS抑制劑干預(yù)組iNOS免疫反應(yīng)陽性表達(dá)顯著減弱，c-kit免疫反應(yīng)陽性表達(dá)則顯著增強(qiáng)(P<0.05)；Real time RT-PCR結(jié)果顯示，iNOS抑制劑干預(yù)組大鼠小腸iNOS mRNA表達(dá)顯著降低(P<0.05)，而c-kit mRNA表達(dá)則顯著上調(diào)(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.POI大鼠胃腸傳輸功能較對照組大鼠顯著減慢；POI大鼠小腸iNO