氨基胍對ROP視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡及iNOS表達的影響.pdf

1、目的:研究氨基胍(aminoguanidine,AG)對高氧誘導的視網(wǎng)膜病變(Oxygen Induced Retinopathy,OIR)小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞凋亡的影響,并探討其可能的機制,為氨基胍治療早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變提供理論依據(jù)。
　　方法:選取7日齡SPF級C57BL/6J小鼠80只(160只眼)隨機分成正常組、高氧組、高氧生理鹽水組、AG治療組,每組20只。正常組一直放于正?？諝庵酗曫B(yǎng);高氧組、高氧生理鹽水組、AG治療組分別

2、于氧濃度為75±2％的氧箱中飼養(yǎng)5天后取出再放于正?？諝庵酗曫B(yǎng)至第17天,建立OIR模型。AG治療組于第7天開始腹腔注射AG(100mg/kg)一天一次直至第17天,高氧生理鹽水組注射等量的生理鹽水。四組小鼠分別于第14天和17天隨機處死10只,取眼球做視網(wǎng)膜石蠟切片,HE染色觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞的形態(tài)學變化并計數(shù)突破視網(wǎng)膜內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核數(shù);末端脫氧核糖核酸介導生物素化脫氧尿嘧啶缺口末端標記(Terminal Deoxynucle

3、otidyl Transferase Biotin-dUTP Nick End Labeling,TUNEL)染色,觀察神經(jīng)細胞凋亡情況并計數(shù)凋亡細胞和計算凋亡指數(shù);免疫組化染色觀察誘導型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表達情況;同時制備電鏡切片,用透射電鏡觀察視網(wǎng)膜神經(jīng)細胞超微結(jié)構的改變。
　　結(jié)果:凋亡細胞主要位于視網(wǎng)膜內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細胞層,第14天明顯多于第17天;

4、TUNNEL染色陽性細胞數(shù)目高氧組明顯多于正常組(P<0.05),AG治療組明顯少于高氧組和高氧生理鹽水組(P<0.05),高氧組和高氧生理鹽水組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。iNOS陽性細胞主要表達于視網(wǎng)膜內(nèi)核層和神經(jīng)節(jié)細胞層,第14天明顯強于第17天。正常組無陽性細胞表達,高氧組神經(jīng)細胞呈強陽性表達,有大量的棕黃色顆粒存在;高氧組與高氧生理鹽水組比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05);AG治療組表達明顯弱于高氧組和高氧生理鹽水組(P<

5、0.05),陽性細胞數(shù)量減少,顏色變淺。第17天突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細胞核數(shù)量,高氧組較多,AG治療組較高氧組明顯減少(P<0.05);高氧組與高氧生理鹽水組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。透射電鏡下可發(fā)現(xiàn)高氧組神經(jīng)細胞膜皺縮,線粒體腫脹、空泡變,嵴變短、消失,核固縮,核周隙增寬,異染色質(zhì)增多,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張等;AG治療組神經(jīng)細胞排列整齊,胞膜完整,線粒體輕度腫脹,核周隙輕度增寬,嵴模糊不清,染色質(zhì)疏松等。
　　結(jié)論:AG可保護OI