氨基胍對心肌缺血再灌注損傷的影響.pdf

1、心肌缺血再灌注損傷(myocardial ischemia/reperfusion iniury，MIRI)是圍手術(shù)期面臨的一種常見的病理生理變化。已成為阻礙缺血心肌從再灌注療法中獲得最佳療效的主要難題，因而對于缺血心肌保護的研究是倍受關(guān)注的課題。大量動物實驗及臨床試驗均表明，自由基在缺血再灌注損傷的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用，清除自由基可促進缺血后心肌的功能恢復，減輕再灌注損傷。細胞凋亡是心肌缺血再灌注損傷發(fā)病機制的重要環(huán)節(jié)之一，線粒體在

2、細胞整合各種凋亡刺激信號的過程中處于樞紐地位。作為體內(nèi)的一種重要化學遞質(zhì)和細胞內(nèi)信號分子，NO一直倍受醫(yī)學界的關(guān)注。人們對其在體內(nèi)各種生理和病理過程中的調(diào)節(jié)作用進行了大量研究，許多研究結(jié)果表明，NO在心肌缺血再灌注損傷中起著十分重要的作用，但關(guān)于NO在心肌缺血再灌注損傷中的作用，仍是一個尚存有爭議的問題。氨基胍為iNOS抑制劑，其對心肌缺血再灌注損傷的影響尚未見報道。 本研究通過建立缺血再灌注心肌損傷動物模型，觀察氨基胍對心肌的

3、機械功能、能量代謝、形態(tài)損傷等的改善作用，并探討氨基胍的心肌保護作用機制，為其臨床應用提供實驗依據(jù)。 第一部分氨基胍對缺血再灌注損傷大鼠心肌自由基的影響目的：觀察氨基胍對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響并從氧化應激探討其作用機制。 方法：阻斷大鼠左冠狀動脈前降支30min，再灌注2h引起心肌缺血再灌注損傷。30只SD雄性大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)和氨基胍100mg/kg組(AG)，每組10只。P

4、owerIab/8s多導生理儀記錄各組大鼠缺血再灌注2h末左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、左室壓力變化速率(±dp/dtmax)；測定血清中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)活性、一氧化氮(NO)含量及誘導型一氧化氮合酶(iNOS)活性；測定心肌組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量，透射電鏡觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果： 1.再灌注2h末，與假手術(shù)組比較，I/R組LVDP

5、、±dp/dtmax明顯降低(P＜0.05,P＜0.01.)，LVDEP明顯升高(P＜0.05)。血清LDH和CK活性明顯增強(P＜0.01)；與I/R組比較，氨基胍組能明顯改善缺血再灌后的心功能(P＜0.05)，降低血清LDH、CK的活性(P＜0.05)。 2.與假手術(shù)組比較，I/R組SOD活性明顯降低(P＜0.01)。而MDA、 NO的含量明顯增加、iNOS活性明顯增強(P＜0.01)；與I/R組比較，氨基胍組SOD活性明顯

6、增強(P＜0.01)，MDA、NO的含量明顯減少(P＜0.05)，iNOS活性明顯降低(P＜0.01)。 3.超微結(jié)構(gòu)觀察顯示：I/R組心肌纖維排列紊亂，心肌細胞間及核周高度水腫；肌纖維減少、肌節(jié)消失；線粒體膜嚴重腫脹，部分線粒體基質(zhì)水腫，嵴排列紊亂，斷裂、溶解、消失，可見線粒體髓樣化，線粒體內(nèi)糖原顆粒明顯減少。氨基胍組心肌組織的超微結(jié)構(gòu)特別是線粒體損傷明顯減輕。結(jié)論：氨基胍對大鼠缺血再灌注損傷心肌有一定的保護作用，減少缺血再灌

7、注情況下自由基的含量，降低氧化應激造成的損傷可能是其作用機制之一。 第二部分氨基胍對缺血再灌注損傷大鼠心肌線粒體功能及細胞凋亡的影響目的：觀察氨基胍對大鼠心肌缺血再灌注損傷的影響并從線粒體功能及細胞凋亡方面探討其作用機制。 方法：阻斷大鼠左冠狀動脈前降支30min，再灌注2h引起心肌缺血再灌注損傷。30只SD雄性大鼠隨機分為假手術(shù)組(Sham)、缺血再灌注組(I/R)、氨基胍100mg/kg組(AG)，每組10只。Pow

8、erIab/8s多導生理儀記錄各組大鼠缺血再灌注2h末左室發(fā)展壓(LVDP)、左室舒張末壓(LVDEP)、左室壓力變化速率(±dp/dtmax)；差速離心法提取心肌線粒體，測定線粒體活性、膜腫脹度，以及線粒體總ATP酶、超氧化物岐化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量；流式細胞術(shù)檢測心肌細胞凋亡率、免疫組化法測定Bcl-2、Bax蛋白的表達。 結(jié)果： 1.再灌注2h末，與假手術(shù)組比較，I/R組LVDP，±dp/dtmax明

9、顯降低(P＜0.01)，LVDEP明顯升高(P＜0.05)；AG組LVDP、±dp/dtmax明顯高于I/R組(P＜0.05,P＜0.01)，LVDEP明顯低于I/R組(P＜0.05)。表明氨基胍改善了缺血再灌注后的心功能。 2.I/R組心肌線粒體總ATP酶、SOD活性明顯低于假手術(shù)組(P＜0.01)，MDA含量明顯高于假手術(shù)組(P＜0.05)，線粒體膜腫脹度、線粒體活性下降，表現(xiàn)為540nm和570nm處吸光度值下降(P＜0.

10、01)；與I/R組比較，氨基胍組總ATP酶、SOD活性明顯升高(P＜0.05,P＜0.01)，MDA含量明顯減少(P＜0.05)，心肌線粒體活性有所恢復，膜腫脹度減輕(P＜0.01)。 3.I/R組心肌細胞凋亡率(15.38±0.48)明顯高于假手術(shù)組(5.18±0.33)(P＜0.01)；氨基胍組心肌細胞凋亡率(13.55±0.93)明顯低于I/R組(P＜0.01)。I/R組Bcl-2和Bax表達陽性細胞數(shù)百分率較假手術(shù)組明顯