氨基胍對糖尿病大鼠眼表改變的影響.pdf

1、目的：糖尿病(DM)是以糖代謝紊亂為主的常見全身性疾病，患病率逐年提高。DM可引起眼部多種并發(fā)癥，近年來的臨床資料觀察到DM患者出現(xiàn)眼干澀、異物感、燒灼感的癥狀較普遍。本實驗制作鏈脲佐菌素(STZ)大鼠DM動物模型，通過測量淚膜破裂時間(BUT)和基礎(chǔ)淚液分泌量(Schirmer-I試驗)觀察DM對照組(DM組)及氨基胍(AG)治療組(治療組)大鼠眼表穩(wěn)定性的改變；并通過觀察淚腺、結(jié)膜和角膜的組織病理學(xué)改變及腫瘤壞死因子-α(TNF-α

2、)、核轉(zhuǎn)錄因子-KBp65(NF-KBp65)、糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的免疫組織化學(xué)染色的改變，探討DM造成的眼表組織改變、發(fā)病機(jī)制以及AG對DM眼表病變的治療效果，從而為DM眼表改變提供病理學(xué)基礎(chǔ)，并為其治療DM眼表疾病提供新的線索和理論依據(jù)。 方法： 1.實驗分組 將30只180-200g雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為3組：正常對照組(正常組)10只，DM對照組(DM組)10只，AG治療組(治療組)10只

3、。 2.DM動物模型的制備禁食12h后，對三組大鼠碘伏消毒腹腔注射部位，DM組和治療組大鼠腹腔一次性注射10g/L的STZ65mg/kg(溶于20mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液，pH4.5)，之后72h和實驗中每4wk檢測一次血糖，血糖始終大于16.7mmol/L者納入實驗。正常組腹腔一次性注射等量的20mmol/L枸櫞酸鈉緩沖液(pH4.5)。 3.給藥方式從腹腔注射STZ 72h開始，對三組大鼠碘伏消毒腹腔注射部位，治療

4、組給予腹腔注射新鮮配制的0.2％AG(80mg/kg.d，用25mmol/L、pH為7.4的磷酸鈉緩沖液配制)，DM組和正常組分別給予腹腔注射同等劑量的磷酸鈉緩沖液(pH為7.4)，1/d。 觀察指標(biāo) 每日觀察各組大鼠的飲水量、飲食量和尿量。每周使用天平稱大鼠體重并記錄。注射STZ 72h后和每4周大鼠尾端75％酒精消毒后針刺取血，檢測血糖。12wk行BUT和Schirmer-Ⅰ試驗，脫頸椎法分別處死大鼠每組各10只，立

5、即摘除淚腺、結(jié)膜和角膜，用10g/L中性多聚甲醛固定備HE染色和免疫組織化學(xué)染色用。 結(jié)果： 1.正常組大鼠體重隨時間延長而逐漸增加；DM組大鼠和治療組大鼠在STZ注射后2-12wk體重明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)，在各時間點(diǎn)，DM組和治療組大鼠體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)(Fig1)。 2.DM組和治療組大鼠血糖在注射STZ 72h后明顯高于正常組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)

6、；治療組和DM組在各時間點(diǎn)大鼠血糖差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(Fig2)。 3.BUT和Schirmer-Ⅰ試驗值的測定：與正常組比較，DM組降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)，治療組亦降低，有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；治療組較DM組明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。 4.淚腺、結(jié)膜和角膜組織病理學(xué)變化：DM組大鼠淚腺腺泡變小，細(xì)胞核固縮、深染，細(xì)胞分界不清，結(jié)膜及角膜損害，表現(xiàn)為結(jié)膜杯狀細(xì)胞減少，角膜上皮

7、和基質(zhì)層水腫；治療組大鼠淚腺、結(jié)膜和角膜病變程度較DM組大鼠減輕，但較正常組大鼠有明顯的差異。 5.TNF-α、NF-KBp65和RAGE在各組大鼠淚腺、結(jié)膜和角膜的變化：TNF-α、NF-KBp65和RAGE在各組大鼠淚腺、結(jié)膜和角膜的胞漿中均有表達(dá)；與正常組比較，DM組和治療組TNF-α、NF-KBp65和RAGE明顯升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)；治療組與DM組相比較，TNF-α、NF-KBp65和RAGE均降低，