硫酸氨基胍對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)型腦血管痙攣的影響研究.pdf

1、目的：研究硫酸氨基胍對兔蛛網(wǎng)膜下腔出血后遲發(fā)型腦血管痙攣的影響及其作用機(jī)制。
　　 方法：采用一側(cè)頸總動脈結(jié)扎+枕大池二次注血法制備蛛網(wǎng)膜下腔出血動物模型，選用健康成年家兔72只隨機(jī)分為假手術(shù)對照組(A組)、SAH組(B組)、氨基胍靜脈干預(yù)組(C組)、氨基胍蛛網(wǎng)膜下腔干預(yù)組(D組)4組，每組再根據(jù)時(shí)間點(diǎn)不同隨機(jī)分為3個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只家兔。A組動物僅進(jìn)行相應(yīng)手術(shù)操作，不進(jìn)行蛛網(wǎng)膜下腔注血，標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)條件下飼養(yǎng)24h、72h、7d

2、；B組動物進(jìn)行兩次蛛網(wǎng)膜下腔注血后標(biāo)準(zhǔn)條件下飼養(yǎng)24h、72h、7d；C組動物在SAH模型制作成功后分別飼養(yǎng)24h、72h、7d，期間予硫酸氨基胍靜脈給藥干預(yù)；D組動物在SAH模型制作成功后再分別飼養(yǎng)24h、72h、7d，期間予硫酸氨基胍蛛網(wǎng)膜下腔給藥干預(yù)。各組動物分別在24h、72h、7d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦，取基底動脈行H-E染色及iNOS免疫組化染色，觀察基底動脈血管變化及內(nèi)皮細(xì)胞iNOS表達(dá)，同時(shí)取海馬組織行眥染色及Bcl-2、B

3、ax免疫組化染色，觀察神經(jīng)元密度及Bax和Bcl-2的表達(dá)，期間每天進(jìn)行一次神經(jīng)生物學(xué)評分，采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　 結(jié)果：H-E染色切片觀察：①基底動脈：A組基底動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞排列整齊，結(jié)構(gòu)正常，動脈壁光滑無增厚；B組血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞變性腫脹，排列紊亂，血管管徑較A組明顯變細(xì)，管壁增厚；C、D組血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹不明顯，管壁無增厚，管徑縮小較B組輕。②海馬CA1區(qū)：A組神經(jīng)元

4、細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核大而圓，核仁清晰，偶見凋亡細(xì)胞，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元密度差異不大，其余三組均見不同程度的神經(jīng)元凋亡；B組可見神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，神經(jīng)元固縮，細(xì)胞核顯示不清，大量錐體細(xì)胞凋亡；C、D兩組神經(jīng)元排列基本整齊，各時(shí)間點(diǎn)神經(jīng)元密度較B組高。免疫組化切片觀察：iNOS、Bcl-2和Bax陽性細(xì)胞主要表現(xiàn)為胞質(zhì)著色，內(nèi)見棕黃色顆粒。③iNOS陽性細(xì)胞觀察結(jié)果：在A組，iNOS陽性細(xì)胞在基底動脈內(nèi)皮中僅見少量表達(dá)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較差

5、異不大，在其余三組基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞明顯表達(dá)；B組與C、D組相比，iNOS陽性細(xì)胞數(shù)表達(dá)多且較強(qiáng)，以72小時(shí)最強(qiáng)，C、D兩組未見此趨勢。④Bcl-2陽性細(xì)胞觀察結(jié)果：在A組，Bcl-2陽性細(xì)胞在海馬神經(jīng)元中有少量表達(dá)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)差異不大，其余三組海馬CA1區(qū)Bcl-2表達(dá)均較A組明顯；其中C、D組與B組相比，各時(shí)間點(diǎn)Bcl-2陽性細(xì)胞數(shù)多且表達(dá)強(qiáng)度強(qiáng)；B組Bcl-2的表達(dá)強(qiáng)度隨時(shí)間呈現(xiàn)先下降，后緩回升趨勢，C、D兩組這種趨勢不明顯。⑤B

6、ax陽性細(xì)胞觀察結(jié)果：在A組，Bax陽性細(xì)胞在海馬神經(jīng)元中有少量表達(dá)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)差異不大，其余三組海馬CA1區(qū)Bax表達(dá)明顯；B組與C、D組相比，Bax陽性細(xì)胞數(shù)多且表達(dá)強(qiáng)度強(qiáng)，在72小時(shí)表達(dá)強(qiáng)度最高，后下降，這種趨勢在C、D組不明顯。神經(jīng)功能評分觀察：A組：進(jìn)食及飲水量基本正常，僅在兩次手術(shù)后有短暫的攝食量下降，無神經(jīng)功能障礙；B、C、D組每次蛛網(wǎng)膜下腔注血后均出現(xiàn)進(jìn)食飲水量減少，轉(zhuǎn)伴不同程度的神經(jīng)功能障礙，以72小時(shí)-96小時(shí)最重

7、，B組癥狀及持續(xù)時(shí)間明顯重于C、D兩組，C、D兩組差異不大。
　　 結(jié)論：⑴手術(shù)切口損傷及結(jié)扎一側(cè)頸總動脈對兔基底動脈血管內(nèi)皮細(xì)胞iNOS及對側(cè)海馬組織中Bcl-2、Bax的表達(dá)無顯著影響。⑵SAH可使基底動脈內(nèi)皮細(xì)胞iNOS及海馬組織中Bcl-2、Bax的表達(dá)升高，Bcl-2/Bax值減小。⑶硫酸氨基胍(Ag)可能通過選擇性抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)的過度表達(dá)、進(jìn)而預(yù)防大量NO所介導(dǎo)的的氧化應(yīng)激反及細(xì)胞毒性反應(yīng)，從而起