蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣發(fā)生的預(yù)測及其干預(yù)研究.pdf

1、第一部分 犬蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣模型的建立 目的：建立成功的犬蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣模型，為下一步實驗提供穩(wěn)定、良好的動物模型。 方法：應(yīng)用自體動脈血枕大池二次注血法對3只犬建立蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣模型，并從進(jìn)食量、神經(jīng)功能、病理組織學(xué)以及腦血管造影等方面于后1d、3d、7d、14d時間點對模型進(jìn)行評估。 結(jié)果：3只犬2只進(jìn)食量＜50％，1只犬＞50％但＜100％；2只犬神經(jīng)功能障礙為2級，1只犬

2、為3級。大體解剖見大量血液沉積基底池、橋池的大動脈周圍，腦底部蛛網(wǎng)膜輕度增厚、黃變，基底池見暗紅色的小凝血塊，基底動脈管壁變細(xì)、變硬，血管壁有炎性反應(yīng)，周圍見增厚的蛛網(wǎng)膜束、絲。病理組織學(xué)檢查見血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，腦組織水腫。DSA顯示腦血管發(fā)生顯著痙攣，以椎基底動脈系統(tǒng)為著。 結(jié)論：應(yīng)用自體動脈血枕大池二次注血法可以建立犬蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣模型，為下一步實驗打下了良好、可靠的動物模型基礎(chǔ)。 第二部分 1HMRS在

3、預(yù)測動脈瘤性蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣發(fā)生中的作用評價 目的：探討proton(1H)magneticresonancespectroscopy(1H-MRS)在蛛網(wǎng)膜下腔出血(SAH)性腦血管痙攣發(fā)生時的評價作用。 方法：應(yīng)用自體動脈血枕大池二次注血法可以建立犬蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣模型，成年健康犬12只，隨機(jī)分為注射生理鹽水組(Control)和注血組(Experiment)，每組各6只。于模型制作成功后3d、7

4、d、14d分別進(jìn)行1H-MRS檢查掃描，記錄膽堿(Cho)、N-乙?；於彼?NAA)和肌酸(Cr)的變化；1H-MRS掃描后即刻進(jìn)行腦血管造影檢查，測定基底動脈血管痙攣發(fā)生情況，與1H-MRS掃描結(jié)果加以比較分析。 結(jié)果：DSA測量結(jié)果提示表明在2次注血后第3d基底動脈血管即發(fā)生顯著痙攣，重復(fù)測量的方差分析結(jié)果表明：上中下三段直徑與注射生理鹽水組相比差異具有顯著性，第7d時血管痙攣最為嚴(yán)重，第3d相比差異也具有顯著性。第14

5、d時血管痙攣有所緩解，各段直徑與對照組相比無顯著性差異。1H-MRS檢測指標(biāo)顯示注血組各項指標(biāo)在3d、7d變化較大，其中NAA在第3d下降到低谷(1.37±0.134)，與對照組(2.29±0.092)相比差異具有顯著性(P＜0.05)；爾后逐漸回升，第7d時達(dá)1.84±0.080，至第14d接近正常水平(1.93±0.080)；Cho在第3d稍有下降，然后上升，至第7d上升至高峰(1.87±0.058)，爾后顯著性下降(1.53±0.

6、136)，與第7d相比差異具統(tǒng)計學(xué)意義；而Cr則一直表現(xiàn)為上升趨勢，但7d(1.15±0.068)后上升趨勢明顯放緩，與第14d(1.240±0.117)相比，其相對含量沒有顯著性差異(P＞0.05)；Naa、Cho、Cr組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，統(tǒng)計參數(shù)分別為：F=106.027,P=0.000；F=953.537,P=0.000；F=1182.15,P=0.000。1H-MRS的功能檢測結(jié)果與腦血管造影結(jié)果具有一定的吻合性。

7、 結(jié)論：1H-MRS可以用來監(jiān)測蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣發(fā)生時病程進(jìn)展，是一種較好的功能影像學(xué)評價手段。 第三部分 促紅細(xì)胞生成素在腦血管痙攣發(fā)生的分子作用機(jī)制探討 目的：探討促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)在蛛網(wǎng)膜下腔出血性腦血管痙攣發(fā)生病理過程中的保護(hù)作用。 方法：27只健康成年犬隨機(jī)分為3組，每組9只，即：陰性對照組(在狗枕小腦延髓池注入等量生理鹽水)；單純注血組(在狗枕小腦延髓池

8、注射新鮮非肝素化自體動脈血)；EPO治療組(在第2次注血前1小時始肌肉注射1000IU/Kg，每日1次，連續(xù)5天)。于動物模型制作成功后1h(0d)、3d、7d和14d采集腦脊液及血漿標(biāo)本，測定其內(nèi)皮素(endothelin，ET-1)和一氧化氮(Nitricoxide,NO)含量變化。應(yīng)用1H-MRS，采用化學(xué)移位成像法于模型制作成功后3d、7d、14d對基底節(jié)區(qū)NAA、Cr、Cho相對含量進(jìn)行波譜檢測對EPO的作用進(jìn)行功能影像學(xué)評價

9、。1H-MRS檢查完后(即3d、7d、14d)每組各處死動物3只，取基底節(jié)區(qū)腦組織和海馬行病理學(xué)和超微結(jié)構(gòu)觀察，并檢測基底節(jié)區(qū)及海馬組織中NF-κb的蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果：病理組織學(xué)及超微結(jié)構(gòu)觀察結(jié)果表明SAH后CVS發(fā)生時腦組織水腫，血管周間隙增寬，出現(xiàn)神經(jīng)元固縮、壞死，有的伴有神經(jīng)元凋亡樣改變，星形細(xì)胞羽狀壞死，血管內(nèi)皮腫脹，間隙增寬；透射電鏡觀察見神經(jīng)髓鞘脫失，部分神經(jīng)元細(xì)胞核邊聚，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整。EPO治療組的腦組織病理

10、形態(tài)學(xué)改變沒有單純注血組明顯。血漿和CSF中ET-1、NO和Glu檢測結(jié)果表明CSF中ET-1、NO和Glu含量變化與血漿中變化相一致。第3d時ET含量注血組顯著高于EPO治療組及NS組(P=0.025＜0.05；P=0.003＜0.01)，而EPO治療組與NS組相比差異無顯著性(P=0.118＞0.05)，說明EPO能夠顯著減緩ET-1的升高。單純注血組血漿和CSF中NO濃度呈逐漸下降的趨勢，在出血后第7天達(dá)到最小值后逐漸上升，在出血

11、后第2周末基本恢復(fù)正常。EPO治療組在3d血漿中NO含量較單純注血組無顯著性差異(P=0.104＜0.05)，但在第7d差異具有顯著性(P=0.014＜0.05)。提示EPO治療能夠減少NO含量降低的程度。單純注血組血漿和CSF中Glu濃度在的3d上升到高峰，而后呈逐漸下降趨勢，在出血后第2周單純注血組仍保持在較高水平，14d時EPO治療組基本恢復(fù)正常，血漿和CSF中Glu的含量在單純注血組和EPO處理組間仍存在顯著性差異(P=0.00

12、5＜0.01；P=0.023＜0.05)。免疫組織化學(xué)結(jié)果表明：SAH后第3d基底節(jié)及海馬組織中NF-κb表迭量升高，至第7d時表達(dá)量有所下降，各時間點、不同組別之間比較存在顯著性差異。1H-MRS檢測結(jié)果表明EPO預(yù)處理能夠顯著改善NAA、Cho和Cr在不同時間點的水平。 結(jié)論：EPO預(yù)處理不僅能夠從生化水平顯著改善CSF和血漿中ET與NO含量，而且可以從功能影像學(xué)的角度改善NAA、Cho和Cr水平，降低腦組織中NF-κb的表