多功能PAMAM聚合物遞藥系統(tǒng)的構(gòu)建及體外抗腫瘤研究.pdf

1、目的：結(jié)合腫瘤部位特定的生理病理特征，本文擬構(gòu)建一種能夠?qū)崿F(xiàn)藥物的主動(dòng)靶向和被動(dòng)靶向結(jié)合以及在腫瘤細(xì)胞內(nèi)定位響應(yīng)釋藥的納米遞藥系統(tǒng)。并對(duì)復(fù)合物進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征和體外評(píng)價(jià)，為其作為抗腫瘤藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)載體提供依據(jù)。
　　方法：首先以第4代聚酰胺-胺（G4.0 PAMAM）樹(shù)狀大分子為載體材料，聚乙二醇（PEG）為修飾劑合成PEG-PAMAM，然后抗腫瘤藥物阿霉素（DOX）通過(guò)酸敏感的腙鍵（hyd）共價(jià)結(jié)合到 PAMAM表面制備 PEG-PA

2、MAM-hyd-DOX。為進(jìn)一步提高復(fù)合物的抗腫瘤活性，葉酸（FA）偶聯(lián)到部分PEG鏈上。通過(guò)控制FA與PAMAM的投料比制備FA配體數(shù)目不同，PEG化程度和載藥量相近的主動(dòng)靶向納米給藥系統(tǒng)FA-PEG-PAMAM-hyd-DOX(FPP-hyd-DOX)。通過(guò)薄層色譜（TLC）、核磁共振波譜（1H NMR）、紅外光譜（FTIR）、動(dòng)態(tài)光散射（DLS）和透射電鏡（TEM）等手段對(duì)合成產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)進(jìn)行表征，紫外分光光度法定量復(fù)合物

3、的載藥量，透析袋法考察PAMAM-DOX的體外釋放行為。通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)優(yōu)化FA配體的連接數(shù)目，計(jì)算各復(fù)合物IC50值，熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀定性定量觀察KB細(xì)胞對(duì)載藥系統(tǒng)的攝取，低溫、能量耗竭和細(xì)胞抑制劑實(shí)驗(yàn)考察內(nèi)吞機(jī)制及攝取途徑，激光共聚焦顯微鏡對(duì)攝取的復(fù)合物進(jìn)行亞細(xì)胞定位研究。
　　結(jié)果：成功合成了FA配體數(shù)目不同，PEG化程度和載藥量相近的PAMAM-DOX復(fù)合物（PP-hyd-DOX, FPP-hyd-DOX4/1, FP

4、P-hyd-DOX8/1和FPP-hyd-DOX16/1）， TLC、1H-NMR、FTIR、DLS及TEM等對(duì)其結(jié)構(gòu)及性質(zhì)進(jìn)行了驗(yàn)證。PAMAM-DOX復(fù)合物的粒徑在20~30 nm之間，Zeta電位約+5 mv，TEM觀察為類球形納米粒子。復(fù)合物的載藥量為6.11±0.12(wt.%)，平均每個(gè)PAMAM表面大約偶聯(lián)了10個(gè)DOX分子。體外釋放實(shí)驗(yàn)觀察PAMAM-DOX復(fù)合物在pH4.5~7.4的釋放介質(zhì)中表現(xiàn)出明顯的pH依賴性，隨

5、pH值的降低，藥物累積釋放量增多。FPP-hyd-DOX16/1（FA與PAMAM的投料比為16/1）具有優(yōu)化的配體數(shù)目且其 IC50值比無(wú)靶頭修飾的PP-hyd-DOX低2.2倍。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)（熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀）表明PAMAM-DOX復(fù)合物的攝取具有時(shí)間依賴性，在1 h或2 h FPP-hyd-DOX16/1的攝取總量明顯高于PP-hyd-DOX。KB細(xì)胞對(duì)復(fù)合物的攝取機(jī)制研究結(jié)果表明 FPP-hyd-DOX16/1和PP-hy