大鼠器官型腦片的培養(yǎng).pdf

1、目的：建立大鼠正常器官型培養(yǎng)腦片模型，并對器官型腦片中的大錐體細胞進行鑒定。器官型腦片培養(yǎng)成功后，可在此基礎(chǔ)上建立各種疾病的器官型腦片模型，探討疾病的發(fā)生發(fā)展機制及規(guī)律。
　　 方法：本實驗應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM，馬血清，Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片，并用抗非磷酸化神經(jīng)微絲單克隆抗體（SMI-32單克隆抗體）進行免疫組化染色，對器官型腦片和在體腦

2、組織的大錐體細胞進行鑒定，根據(jù)在體腦皮層的大錐體細胞對器官型腦片的大錐體細胞進行定位及形態(tài)比較，在200×鏡下測定3個隨機視野中5mm×5mm目鏡測微尺面積下的SMI-32陽性大錐體細胞的數(shù)目，對培養(yǎng)兩周、三周、四周的腦片之間大錐體細胞計數(shù)并比較。
　　 結(jié)果
　　 1 大鼠器官型培養(yǎng)腦片存活率達80％以上，可存活一個月以上。
　　 2 在體大腦皮層內(nèi)，第Ⅴ層細胞為大錐體細胞層，細胞胞體呈現(xiàn)多角形或者橢圓形，胞漿

3、著色淺，有的呈空泡狀，樹突或不明顯，軸突較長，伸向皮層。
　　 3 培養(yǎng)腦片中，按照在體皮層大椎體細胞所分布的位置，可見在大腦皮層深部，第Ⅴ層細胞呈錐體形或者多角形，胞體直徑25～50μm，每個細胞的胞體顏色均一，胞漿著色深，樹突明顯，都有一個長的軸突伸向皮層，軸突較長。隨著培養(yǎng)時間的延長，細胞的橫向突起增長變多。
　　 4培養(yǎng)2、3、4周的腦片中的大錐體細胞計數(shù)分別為28.50±4.34、27.83±4.40、27.6

4、7±3.55，各時點皮層錐體細胞計數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：本實驗應(yīng)用millicell-CM insert微孔膜插入式培養(yǎng)技術(shù)以及由最小培養(yǎng)基MEM，馬血清，Hanks’液組成的培養(yǎng)液成功培養(yǎng)了大鼠器官型腦片，摸索并明確了其生長過程中對溫度、培養(yǎng)液酸堿度、糖含量及氧氣濃度的要求，最佳培養(yǎng)環(huán)境條件為：37℃，培養(yǎng)液PH值為7.2-7.4，糖含量27.76g/L，氣體配比為5％CO2+95％空氣，濕度為99％。培