IgA腎病患者外周血及腎組織樹突狀細(xì)胞的分布及功能研究.pdf

1、[目的]
　　 本實(shí)驗(yàn)擬收集IgA腎病患者的外周血，建立從人外周血分離單核細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)出樹突狀細(xì)胞(Dendritic cells，DCs)的模型，動態(tài)觀察樹突狀細(xì)胞的形態(tài)，并檢測其表型，探討DCs刺激同種T淋巴細(xì)胞活化、增殖能力。通過免疫熒光檢測IgA腎病(IgA nephropathy，IgAN)患者腎臟活檢組織中DCs的分布，圖像分析處理系統(tǒng)軟件定量檢測不同成熟狀態(tài)的DCs在腎臟組織的百分比，分析DCs在IgAN腎組織的分

2、布特點(diǎn)，探討DCs與腎臟病變程度的關(guān)系。
　　 [方法]
　　 一、IgA腎病患者外周血樹突狀細(xì)胞的分離培養(yǎng)及功能研究
　　 1、取6例IgA腎病患者及6例健康對照組的外周血，采用密度離心梯度及連續(xù)貼壁法分離人外周血中單核細(xì)胞，在含GM-CSF、IL-4的完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并且隔天半量更換培養(yǎng)液。
　　 2、用倒置顯微鏡動態(tài)觀察DC的形態(tài)變化。培養(yǎng)至第5天，半量更換培養(yǎng)液之后，在完全培養(yǎng)基中添加TNF-α

3、繼續(xù)培養(yǎng)48小時，收獲DCs。
　　 3、采用流式細(xì)胞術(shù)檢測DC細(xì)胞表型CD1a、CD80的表達(dá)，CD1a作為未成熟DCs的表面標(biāo)記物，CD80作為成熟DCs的表面標(biāo)記物。
　　 4、采用混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Mixed lymphocyte reaction，MLR)，即通過DCs刺激同種T淋巴細(xì)胞的反應(yīng)，檢測DCs刺激T淋巴細(xì)胞增殖活化的能力。
　　 二、IgA腎病患者腎組織樹突狀細(xì)胞的分布特點(diǎn)
　　 收

4、集IgA腎病患者腎組織15例（其中Lee氏分級Ⅱ級4例，Ⅲ級6例，Ⅳ級5例）及腎腫瘤患者遠(yuǎn)離腎腫瘤5cm的正常腎組織5例，通過免疫熒光檢測IgA腎病患者腎臟活檢組織中DCs的分布，圖像分析處理系統(tǒng)軟件定量檢測不同成熟狀態(tài)的DCs在腎臟組織的百分比，分析DCs在IgAN腎組織的分布特點(diǎn)。
　　 [結(jié)果]
　　 1、病例組及對照組的年齡差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2、外周血DCs的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　

5、 2.1、外周血分離的單核細(xì)胞經(jīng)貼壁培養(yǎng)7天，收獲大量的DCs。
　　 2.2、顯微鏡下IgA腎病組的細(xì)胞數(shù)、DCs的突起及含有突起的細(xì)胞數(shù)均較對照組少。
　　 2.3、收獲的DCs用流式細(xì)胞儀檢測DCs的表面標(biāo)記物CD1a、CD80，病例組中CD1a表達(dá)率為(25.31±11.77)％、CD80的表達(dá)率為(49.64±15.40)％;對照組中CD1a表達(dá)率為(47.31±13.38)％、CD80的表達(dá)率為(63.00

6、±17.60)％。兩組DCs的CD1a的表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而CD80的表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.4、病例組DCs對同種T淋巴細(xì)胞的增殖活化能力增強(qiáng)。當(dāng)刺激細(xì)胞:反應(yīng)細(xì)胞（即DCs:同種T淋巴細(xì)胞）比值為1∶10時，組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)，當(dāng)比值為1∶20和1∶30時，組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 3、腎組織的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　 DCs的C

7、D1a在正常腎組織、Lee氏Ⅱ級、Lee氏Ⅲ級及Lee氏Ⅳ級的表達(dá)率分別為（0.20±0.01）％、（1.79±0.04）％、（2.55±0.16）％、（4.61±0.07）％，而DCs的CD80在正常腎組織、Lee氏Ⅱ級、Lee氏Ⅲ級及Lee氏Ⅳ級的表達(dá)率分別為（0.23±0.01）％、（1.82±0.04）％、(2.26±0.06)％、(4.19±0.10)％。正常對照組、Lee氏Ⅱ級、Lee氏Ⅲ級及Lee氏Ⅳ級之間的比較，差異均有

8、統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　 [結(jié)論]
　　 1、IgA腎病患者外周血誘導(dǎo)分化的DCs細(xì)胞數(shù)、DCs的突起、含有突起的細(xì)胞數(shù)及表面標(biāo)記物CD1a、CD80均較對照組少，兩組未成熟DCs的表面標(biāo)記物CD1a的表達(dá)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，而成熟DCs的表面標(biāo)記物CD80的表達(dá)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。病例組的DCs刺激同種T淋巴細(xì)胞增殖活化的能力增強(qiáng)，與刺激細(xì)胞跟反應(yīng)細(xì)胞的數(shù)量及比值有關(guān)。