初治結(jié)核病患者樹突狀細(xì)胞免疫功能研究.pdf

1、目的:機(jī)體結(jié)核病免疫主要依賴以T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫為主。機(jī)體對結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)產(chǎn)生細(xì)胞免疫必須由抗原提呈細(xì)胞(antigenpresenting cell，APC)介導(dǎo)。作為最有效的抗原提呈細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)在結(jié)核病免疫中的作用日益受到關(guān)注。研究發(fā)現(xiàn)肺結(jié)核病患者DC功能有一定程度的缺損，并且當(dāng)MTB感染后DC的成熟標(biāo)記表達(dá)水平降低，表明DC的

2、成熟受到MTB的抑制。本實(shí)驗(yàn)通過體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法對初治結(jié)核病患者DC細(xì)胞表面成熟標(biāo)志的表達(dá)、細(xì)胞因子的分泌、以及對T淋巴細(xì)胞的刺激作用等進(jìn)行研究，探討外周血DC在結(jié)核病發(fā)病機(jī)制中的作用，為開發(fā)抗結(jié)核病的免疫治療方法和開發(fā)新型的抗結(jié)核疫苗提供重要的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集石家莊市第五醫(yī)院就診的初治結(jié)核病患者58例，根據(jù)《臨床診療指南-結(jié)核病分冊》的診斷標(biāo)準(zhǔn)分為菌陰組30例，菌陽組28例。對照組收集健康體檢者30例

3、。
　　2.無菌采集初治結(jié)核病患者和健康體檢者外周靜脈血5ml，10U/ml的肝素抗凝，用淋巴細(xì)胞分離液經(jīng)密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞，貼壁3小時(shí)后將非黏附細(xì)胞洗去，將貼壁細(xì)胞在含有rhGM-CSF和rhIL-4的AIM-V培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)。分別在第2、4、6天進(jìn)行半量換液，第7天收集DC。在培養(yǎng)的過程中用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的大小、形態(tài)及生長情況，并拍照記錄。
　　3.用FITC標(biāo)記的CD83和PE標(biāo)記的CD86抗體標(biāo)記各組

4、DC，用流式細(xì)胞儀檢測各組DC的表面標(biāo)志CD83和CD86的表達(dá)率。
　　4.以同種異體混合淋巴細(xì)胞作為靶細(xì)胞，用經(jīng)絲裂霉素C處理過的各組DC作為刺激細(xì)胞，用MTT法檢測各組DC促進(jìn)同種異體T淋巴細(xì)胞的增殖能力。
　　5.采用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)檢測各組DC培養(yǎng)上清中及各組血清中的IL-12、IL-10、INF-γ的含量。
　　6.匯總整理所有數(shù)據(jù)，并應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，以P＜0.05作為檢驗(yàn)

5、水準(zhǔn)，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，進(jìn)行兩樣本均數(shù)的t檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1.用倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)初治結(jié)核病患者的DC在培養(yǎng)過程中，DC生長密度比正常對照組的密度低，形態(tài)也不及正常對照組的形態(tài)典型。
　　2.正常對照組、菌陰組和菌陽組CD83的表達(dá)量分別為（9.18±6.91）％、(4.10±3.13)％和(2.36±1.31)％;CD86的表達(dá)量分別為（92.23±2.62）％、(71.90±12.43)

6、％和(69.33±13.62)％。菌陰組和菌陽組CD83、CD86的表達(dá)均顯著低于正常對照組(p＜0.001)，菌陽組CD83的表達(dá)顯著低于菌陰組(p＜0.05)，而菌陰組與菌陽組CD86的表達(dá)差異無顯著性(p＞0.05)。
　　3.混合淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)的結(jié)果:正常對照組、菌陰組和菌陽組刺激指數(shù)(SI)分別為（5.74±2.20）％、(3.42％±1.25)％和(2.96％±1.27)％。菌陰組和菌陽組均顯著低于正常對照組(p＜0

7、.01)，而菌陰組與菌陽組比較差異無顯著性（p＞0.05）。
　　4.各組DC培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子水平變化:正常對照組、菌陰組和菌陽組DC培養(yǎng)上清中IL-12的含量分別為(21.80±8.04) pg/ml、(31.83±16.95)pg/ml和(30.99±14.72) pg/ml，菌陰組和菌陽組均顯著高于正常對照組(p＜0.05)，而菌陰組與菌陽組比較差異無顯著性(p＞0.05);IL-10的含量分別為(4.04±0.80) p

8、g/ml、(4.66±1.45) pg/ml和(4.32±0.88) pg/ml，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05）;IFN-γ的含量分別為(8.28±2.86) pg/ml、9.50±3.26)pg/ml和(9.73±4.56)pg/ml，各組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　5.各組血清細(xì)胞因子水平變化:正常對照組、菌陰組和菌陽組血清IL-12的含量分別為（55.38±24.93）pg/ml、（39.34±16.9

9、5）pg/ml和（37.01±14.95）pg/ml，菌陰組和菌陽組均顯著低于正常對照組(p＜0.01)，而菌陰組與菌陽組比較差異無顯著性（p＞0.05）;血清IL-10的含量分別為（41.33±21.44）pg/ml、（111.01±41.80）pg/ml和（122.27±69.45）pg/ml，菌陰組和菌陽組均顯著高于正常對照組(p＜0.001)，而菌陰組與菌陽組比較差異無顯著性（p＞0.05）;血清IFN-γ的含量分別為（27.1

10、2±17.71）pg/ml、（19.08±10.49）pg/ml和（17.67±9.71）pg/ml，菌陰組和菌陽組均顯著低于正常對照組(p＜0.05)，而菌陰組與菌陽組比較差異無顯著性(p＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.初治結(jié)核病患者外周血DC的表面標(biāo)志CD83和CD86的表達(dá)量比正常對照組顯著降低，刺激淋巴細(xì)胞增殖的能力也顯著降低，提示初治結(jié)核病患者外周血DC的抗原提呈能力下降。
　　2.初治結(jié)核病患者外周血D