氫鹽水對(duì)Galn-LPS誘導(dǎo)小鼠肝損傷的保護(hù)作用及其抗凋亡機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:建立D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素(Galn/LPS)誘導(dǎo)的小鼠急性肝損傷模型，研究氫對(duì)急性肝損傷的保護(hù)作用;初步探討其抗凋亡的機(jī)制，為進(jìn)一步研究氫治療相關(guān)疾病的作用機(jī)制提供科學(xué)依據(jù)。
　　 研究方法:通過腹腔注射D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素誘導(dǎo)成功建立小鼠急性肝損傷模型，建模后隨機(jī)分組為生理鹽水、N-乙酰半胱氨酸、氫鹽水組，自動(dòng)生化分析儀檢測血清轉(zhuǎn)氨酶水平，觀察肝臟大體形態(tài)學(xué)改變，HE染色檢測肝組織病理改變，采用TdT介導(dǎo)的dUT

2、P缺口末端標(biāo)記技術(shù)（TUNEL法）檢測組織細(xì)胞凋亡情況，比較各組肝細(xì)胞凋亡率。用Real-time PCR(實(shí)時(shí)定量PCR)檢測各組肝組織中P53及MDM2 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 (1)生理鹽水對(duì)照組小鼠血清ALT值25.51±8.91 U.L-1，AST值33.71±7.88 U.L-1。D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素誘導(dǎo)建模后模型組ALT值為2314.34±327.47 U.L-1，AST值為2219.26±

3、423.23 U.L-1。兩組間比較有顯著性差異(P＜0.01)。造模后生理鹽水干預(yù)組ALT值2415.26±326.28 U.L-1，AST值為2529.26±415.12 U.L-1; N-乙酰半胱氨酸組ALT值為356.90±121.95 U.L-1，AST值為423.97±78.43U.L-1。兩組比較間有顯著差異(P＜0.01);氫鹽水組ALT值為443.63±116.61 U.L-1，AST值為363.92±114.39U.

4、L-1，與生理鹽水干預(yù)組比較有顯著差異(P＜0.01);氫鹽水組與N-乙酰半胱氨酸組無顯著差異(P＞0.05)。
　　 (2)肝大體形態(tài)學(xué)改變:生理鹽水對(duì)照組肝臟形態(tài)正常，被膜光滑、完整、色澤紅潤、質(zhì)地柔軟。模型組肝臟明顯腫脹，肝臟表面可見片狀出血點(diǎn)，呈醬紫色，質(zhì)地偏韌;建模后生理鹽水干預(yù)組肝臟明顯腫脹，淤血，肝臟表面呈醬紫色表面，質(zhì)地偏韌;氫生理鹽水組、N-乙酰半胱氨酸組:肝臟稍腫脹、充血，肝臟表面色澤發(fā)白。
　　 (

5、3)組織病理學(xué)改變:生理鹽水對(duì)照組:小鼠肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝小葉結(jié)構(gòu)完整，無病理改變;模型組:細(xì)胞壞死廣泛而嚴(yán)重，細(xì)胞溶解，肝索解離，出現(xiàn)彌漫性的大片壞死，壞死區(qū)周圍肝細(xì)胞發(fā)生不同程度的氣球樣變及嗜酸性變，小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，小葉內(nèi)及匯管區(qū)有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤，殘存肝細(xì)胞水腫變性。建模后生理鹽水組:出現(xiàn)彌漫性的大片壞死，細(xì)胞溶解，小葉結(jié)構(gòu)模糊不清，小葉內(nèi)及匯管區(qū)有淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主的炎細(xì)胞浸潤，殘存肝

6、細(xì)胞水腫變性，與模型組無明顯變化。N-乙酰半胱氨酸干預(yù)組:肝小葉內(nèi)血管擴(kuò)張充血，出現(xiàn)輕微肝細(xì)胞腫脹、胞漿疏松，有散在炎性細(xì)胞浸潤;氫鹽水組:肝小葉中央靜脈周圍有點(diǎn)狀壞死，散在炎細(xì)胞浸潤及嗜酸小體形成。N-乙酰半胱氨酸、氫鹽水干預(yù)后肝臟組織病理學(xué)得到明顯改善。
　　 (4)小鼠凋亡細(xì)胞數(shù):生理鹽水對(duì)照組為3.51±1.21％，模型組為73.5±3.27％，兩者比較有顯著性差異(P＜0.01)。建模后生理鹽水干預(yù)組為72.5±4.2

7、7％，N-乙酰半胱氨酸組為45.3±2.24％，兩組比較，有顯著性差異(P＜0.01)。氫鹽水組為46.4±1.57％，生理鹽水干預(yù)組與氫鹽水組比較有顯著性差異(P＜0.01)。N-乙酰半胱氨酸組與氫鹽水組比較無明顯差異(p＞0.05)。
　　 (5) P53mRNA的表達(dá):(2-△△CtPP):生理鹽水對(duì)照組為0.1346±0.3476;模型組為1.0235±0.054;兩者有顯著性差異(P＜0.01)。建模后生理鹽水干預(yù)組為

8、1.0564±0.0234， N-乙酰半胱氨酸組為0.5490±0.0657，兩者有顯著性差異(P＜0.01)。氫鹽水組P53為0.4395±0.0217，與建模后生理鹽水干預(yù)組P53 mRNA的表達(dá)有顯著性差異(P＜0.01)。氫鹽水組與N-乙酰半胱氨酸組比較無明顯差異(P＞0.05)。
　　 (6) MDM2 mRNA的表達(dá)(2-△△CtPP):生理鹽水對(duì)照組為0.3467±0.0123，模型組為0.1452±0.0424，

9、兩者比較有顯著性差異(P＜0.01)。建模后生理鹽水干預(yù)組為0.1390±0.0453，N-乙酰半胱氨酸組為0.5490±0.0657，兩者有顯著性差異(P＜0.05)。氫鹽水組為0.4395±0.0217，與造模后生理鹽水干預(yù)組比較有顯著性差異(P＜0.01)。N-乙酰半胱氨酸組與氫鹽水組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)成功建立了D-氨基半乳糖/內(nèi)毒素誘導(dǎo)的急性小鼠肝損傷模型。