內(nèi)毒素耐受對Galn-LPS誘導(dǎo)肝臟MAPK和STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路影響.pdf

1、目的：利用小鼠內(nèi)毒素耐受(endotoxintolerance，ETT)模型，探討ETT態(tài)對半乳糖胺/脂多糖(Galn/LPS)誘導(dǎo)急性肝損傷發(fā)生及Galn/LPS對肝臟MAPK和STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。 方法：實驗1.雄性昆明小鼠66只，隨機分為三組，(1)對照組：腹腔注射0.9％NaCl0.2ml；(2)Galn/LPS組：腹腔注射(Galn13mg/LPS3μg)/只；(3)內(nèi)毒素耐受組(ETT)：連續(xù)三次間隔24小時腹腔

2、注射LPS2mg/kg，于LPS第三次注射24小時后腹腔注射Galn/LPS，劑量與Galn/LPS組相同。各組動物分別于注射生理鹽水或Galn/LPS后0.5h(n=4)、1.5h(n=8)、6h(n=10)，在戊巴比妥鈉麻醉下經(jīng)眼內(nèi)眥采血、開腹取肝，用于血漿ALT、肝臟MDA、TNF-α、GSH含量和GSH/GSSG測定。實驗2.雄性昆明小鼠18只，隨機分為兩組，(1)對照組(n=8)：腹腔注射0.9％NaCl0.2ml；(2)內(nèi)毒

3、素耐受組(ETT，n=10)：LPS所用劑量及處理同實驗一。兩組動物于第三次鹽水或LPS注射24小時后，自小鼠尾靜脈注入按1∶5稀釋的印度墨汁，測定枯否細胞吞噬指數(shù)k及其校正值a。實驗3.動物和分組同實驗1，分別于生理鹽水或Galn/LPS注射后0.5h(n=4)、1.5h(n=8)、6h(n=10)，在戊巴比妥鈉麻醉下開腹取肝臟，用Westernblotting方法檢測肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STAT1、STA

4、T3、SHIP和iNOS蛋白的表達，用放免法測定肝TNF-α含量。 結(jié)果：LPS預(yù)處理可明顯減輕Galn/LPS所致急性肝損傷，經(jīng)LPS預(yù)處理動物血漿ALT活性和肝臟MDA含量明顯下降，而GSH含量、GSH/GSSG則升高。肝勻漿的TNF-α測定結(jié)果表明，損傷組TNF-α含量明顯高于對照組，ETT組TNF-α含量明顯低于肝損傷組(p＜0.05)。ETT對枯否細胞吞噬功能無明顯影響，與對照組相比吞噬指數(shù)無統(tǒng)計學差異(p＞0.05)

5、。損傷組肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK蛋白磷酸化表達顯著增強，p-MEK1/2、p-ERK1/2均在LPS刺激0.5h顯著升高，持續(xù)維持至6.0h，而p38MAPK蛋白則在LPS刺激0.5h后達到高峰，后逐漸下降至6.0h時維持基礎(chǔ)水平。STAT1和STAT3蛋白在Galn/LPS刺激后6.0h時肝臟STAT1和STAT3磷酸化表達增強。ETT組LPS預(yù)處理可顯著抑制肝臟MEK1/2、ERK1/2、p38MAPK、STA