TNF-α介導內(nèi)毒素上調(diào)心肌細胞14-3-3γ亞型表達.pdf

1、目的：探討脂多糖(LPS)對大鼠心肌細胞14-3-3蛋白表達的影響以及TNF-α在其中的作用。 方法：實驗用SD新生大鼠心臟，分離純化制成心肌細胞，在培養(yǎng)的第4 d，(1)隨機分為4組以不同劑量LPS處理做LPS損傷模型并孵育12h: 0 mg/l(C)、1 mg/l(LPSl)、10 mg/l(LPS2)、100 mg/l(LPS3)。觀察：心肌細胞搏動頻率；細胞存活率(MTT法)：培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(LDH)；檢測TNF-α

2、 mRNA及ELISA測定細胞上清TNF-α蛋白含量： RT-PCR法及Western Blotting法分別檢測14-3-3 γ mRNA及蛋白的表達變化。(2)繼續(xù)做TNF-α損傷模型，制得心肌細胞在培養(yǎng)的第4d隨機分為劑量不同的5組孵育12h:0IU/ml(C)、100IU/ml(TNF1)、300IU/ml(TNF2)、900 IU/ml(TNF3)、2700 IU/ml(TNF4)，然后檢測14-3-3 γ mRNA及蛋白的表

3、達變化。 結(jié)果：(1)LPS處理模型：心肌細胞搏動頻率除了LPS1與Control組相比無差異(p＞0.05)，其余，均減弱(p＜0.05)；與正常對照組相比，不同LPS劑量，細胞不同程度受損，細胞存活率較Control組不同程度降低(p＜0.05或p＜0.01)；各組的細胞懸液中LDH顯著增加(p＜0.05或p＜0.01)。而且，細胞的搏動頻率及細胞的存活率隨LPS處理劑量的增加而明顯減少，LDH活性隨劑量增加而升高。LPS刺

4、激使TNF-α mRNA及蛋白的表達明顯升高(p＜0.01)。14-3-3蛋白及γ亞型mRNA的表達隨劑量增加先升后降，蛋白的表達基本同于mRNA的變化趨勢但不完全同步。(2)TNF-α處理組14-3-3蛋白及γ亞型mRNA的表達有隨劑量先高后低的趨勢，與LPS處理的14-3-3的表達變化有一定的一致性。 結(jié)論： 1、從細胞水平進一步證實LPS對心肌細胞膜有損傷作用。 2、14-3-3蛋白γ亞型在正常心肌細胞內(nèi)有