復(fù)合機(jī)制介導(dǎo)的α-常春藤皂苷肝腫瘤主動(dòng)靶向給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、本文以肝腫瘤細(xì)胞上的ASGPR和CD147分子為靶標(biāo)，采用N-乳糖酰殼聚糖(GC)和CD147單抗分別實(shí)現(xiàn)受體介導(dǎo)與抗體介導(dǎo)，以α-常春藤皂苷為模型藥物，將其制備成“受體+抗體”的雙重復(fù)合機(jī)制介導(dǎo)的肝腫瘤主動(dòng)靶向納米給藥系統(tǒng)。
　　采用乳化溶劑擴(kuò)散法制備了α-Hed-GC-NP，考察并優(yōu)化了納米粒的處方和制備工藝，確定影響納米粒質(zhì)量的關(guān)鍵要素為GC用量:50 mg，磷脂用量:80 mg，有機(jī)相體積:4mL。所制得的α-Hed-GC

2、-NP外觀圓整、分布均勻，平均粒徑（88.70±1.22）nm，包封率（78.53±4.39）％,P.I.值0.105±0.011;藥物在載體材料中分散均勻，釋藥行為具有一定的pH敏感性和緩釋特性。
　　建立了CD147單抗的含量和活性測(cè)定方法，采用偶聯(lián)法、溶解法、注入法、吸附法及修飾法等5種方法制備了α-Hed-GC-CD147-NP，分別進(jìn)行粒徑測(cè)定、FT-IR表征和納米粒中單抗活性測(cè)定。結(jié)果表明，CD147均被α-Hed-G

3、C-NP有效包載，采用修飾法制備的α-Hed-GC-CD147-NP，平均粒徑為(139.53±4.17)nm，CD147單抗的修飾量為1.25μg/mgNP，單抗的活性保留率為53.65％。
　　對(duì)α-Hed-GC-CD147-NP的細(xì)胞毒作用、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、細(xì)胞攝取率及攝取過(guò)程進(jìn)行考察，并與其它3種納米粒進(jìn)行比較。結(jié)果表明，α-Hed及其含藥納米粒對(duì)SMMC-7721和HepG2兩種細(xì)胞均有顯著的抑制作用，α-Hed-GC-C

4、D147-NP對(duì)兩種細(xì)胞的IC50最低，分別為（23.51±1.22）、(23.30±0.22)μg/mL;納米粒能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并呈現(xiàn)劑量依賴(lài)性，α-Hed-GC-CD147-NP低、中、高劑量(50、100、200μg/mL)誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的凋亡率分別為7.10％、11.87％、25.78％，高于其他納米粒;HepG2細(xì)胞對(duì)α-Hed-GC-CD147-NP的細(xì)胞攝取率最高，2h和24h分別達(dá)（86.73±11.29）％和（94

5、.61±4.42）％;隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，納米粒大部分被攝入到包漿，并能進(jìn)入細(xì)胞核，α-Hed-GC-CD147-NP與HepG2細(xì)胞的親和力更強(qiáng)，具有良好的肝腫瘤細(xì)胞靶向性。
　　研究了α-Hed-GC-CD147-NP的急性毒性，對(duì)荷HepG2移植瘤裸鼠的抗腫瘤活性及體內(nèi)靶向性。結(jié)果表明，各納米粒小鼠尾靜脈注射LD50均在12mg.kg-1以上，高于原料藥;各劑量組對(duì)荷HepG2細(xì)胞裸鼠腫瘤的抑制率IRw均在70％以上，遠(yuǎn)高于原料

6、藥中劑量組;具有雙重復(fù)合介導(dǎo)機(jī)制的α-Hed-GC-CD147-NP抑瘤率最高，低、中、高3個(gè)劑量組的抑瘤率分別為84.96％、88.25％、92.46％，顯示了更好的肝腫瘤靶向性。荷瘤裸鼠近紅外熒光成像實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，經(jīng)受體或抗體介導(dǎo)的納米粒，腫瘤和肝臟靶向性更強(qiáng)。
　　建立了UPLC-MS法測(cè)定體內(nèi)血漿及組織樣品中α-Hed的分析方法，考察α-Hed-GC-CD147-NP在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)特征，及在荷瘤裸鼠體內(nèi)組織分布情況

7、。結(jié)果表明，藥物在大鼠體內(nèi)呈雙室模型，α-Hed-GC-NP、α-Hed-CS-CD147-NP及α-Hed-GC-CD147-NP的t1/2(α)分別為0.12、0.10、0.05h，t1/2(β)分別為0.97、2.30、1.93h，與原料藥相比，各納米粒體內(nèi)分布加快，消除減慢。以α-Hed的AUC為參照，上述3種納米粒的生物利用度顯著提高，分別為120％、300％及280％?？贵w或受體介導(dǎo)的納米粒，在肝臟和腫瘤組織內(nèi)的藥物量遠(yuǎn)遠(yuǎn)高