KiSS-1基因?qū)θ焉镒甜B(yǎng)細胞生物學(xué)行為影響及其在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中作用機制的研究.pdf

1、目的:探討KiSS-1基因?qū)θ焉镒甜B(yǎng)細胞生物學(xué)行為的影響及其在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中的作用機制。
　　方法:①免疫組織化學(xué)方法檢測kisspeptin、GPR54在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛及蛻膜組織中表達水平;②構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1;③將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1轉(zhuǎn)染至人滋養(yǎng)層腫瘤JAR細胞株,建立單克隆細胞系;④應(yīng)用RT-PCR及Western Blot方法分別檢測轉(zhuǎn)染細胞KiSS-1的mRNA及編

2、碼多肽kisspeptin表達;⑤檢測KiSS-1基因及外源性kisspeptin對JAR細胞生長增殖、軟瓊脂克隆形成能力及遷移侵襲能力的影響。
　　結(jié)果:①復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者絨毛 kisspeptin、GPR54的表達均明顯低于正常妊娠者(P<0.05),蛻膜組織kisspeptin的表達明顯低于正常妊娠者(P<0.05),蛻膜組織中GPR54的表達在兩組間無明顯差異;②成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1,并經(jīng)PC

3、R和測序鑒定無誤;③將重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KiSS-1成功轉(zhuǎn)染至人滋養(yǎng)細胞腫瘤株JAR細胞;④篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞,并通過 RT-PCR和 Western Blot鑒定目的基因KiSS-1 mRNA和編碼多肽kisspeptin均成陽性表達;⑤KiSS-1基因和kisspeptin對JAR細胞的生長增殖及克隆形成能力無影響,但明顯抑制其遷移和侵襲能力。
　　結(jié)論: Kisspeptin在復(fù)發(fā)性流產(chǎn)患者母胎界面絨毛和蛻膜