nm23-H1基因轉(zhuǎn)染對(duì)人肝癌7721細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的初步研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文nm23H1基因轉(zhuǎn)染對(duì)人肝癌7721細(xì)胞生物學(xué)行為的影響及其機(jī)制的初步研究姓名：徐伯贏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：申宗侯20030524第二部分nm23H1對(duì)全反式維甲酸誘導(dǎo)的SMMC7721細(xì)胞凋亡及其相應(yīng)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的影響為了探討nm23一H1與凋亡的關(guān)系，本文研究了nm23一H1轉(zhuǎn)染對(duì)全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的7721細(xì)胞的凋亡的影響。用流式細(xì)胞儀和熒光染色顯示，在ATRA誘導(dǎo)下，

2、nm23～Hl／7721細(xì)胞的凋亡數(shù)明顯增加，表明nm23一Hl能促進(jìn)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的凋亡。迸一步的研究發(fā)現(xiàn)，在ATRA誘導(dǎo)下，nm23H1／7721細(xì)胞bcl2的表達(dá)沒(méi)有發(fā)生明顯改變，PKB的蛋白表達(dá)也沒(méi)有發(fā)生顯著變化，但其T308、$473位點(diǎn)磷酸化均較Mock細(xì)胞顯著降低，對(duì)抑癌基因p53的檢測(cè)表明，p53的mINA水平明顯下降。結(jié)果表明nm23一Hl轉(zhuǎn)染對(duì)ATRA誘導(dǎo)的7721細(xì)胞的凋亡的影響不是通過(guò)下調(diào)bcl2的表達(dá)實(shí)現(xiàn)的，有可能是

3、通過(guò)上調(diào)p53的表達(dá)，以及降低PKB的T308、$473位點(diǎn)磷酸化從而降低PKB的活性，以此增加7721細(xì)胞對(duì)ATRA誘導(dǎo)的凋亡的敏感性。另外，轉(zhuǎn)染nm23HleDNA后，P53mRNA表達(dá)明顯增強(qiáng)，提示rim23一Ht可能通過(guò)P53途徑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。關(guān)鍵詞：nm23一H，，凋亡，全反式維甲酸，PKB，p53，bcl一2第三部分nm23一H1轉(zhuǎn)染后SMMC7721細(xì)胞黏附、遷移能力的變化及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的探討為了研究nm23一Hl轉(zhuǎn)染對(duì)

4、SMMC7721細(xì)胞轉(zhuǎn)移潛力的影響，本文測(cè)定了轉(zhuǎn)染nm23H1后細(xì)胞黏附、遷移能力的變化，發(fā)現(xiàn)nm23H1轉(zhuǎn)染細(xì)胞的黏附和遷移能力均顯著降低。為了進(jìn)一步探討其黏附和遷移能力變化的機(jī)制，本文測(cè)定了轉(zhuǎn)染細(xì)胞整聯(lián)蛋白亞基值5和Bl的表達(dá)。nm23一HI／7721與Mock細(xì)胞相比，&5亞基的蛋白表達(dá)沒(méi)有發(fā)生明顯改變；而01亞基的蛋白總量也沒(méi)有發(fā)生明顯變化，但nm23一HI／7721細(xì)胞中未成熟的B1亞基(即未糖基化的)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于Mock細(xì)胞。利