ZIC1基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合姜黃素對(duì)人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：
　　探討ZIC1基因轉(zhuǎn)染聯(lián)合姜黃素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231增殖能力以及凋亡誘導(dǎo)能力的影響，以期尋找ZIC1基因與姜黃素在抑癌作用方面可能存在的協(xié)同作用，為我們將來(lái)進(jìn)一步探討ZIC1聯(lián)合姜黃素在腫瘤形成中的機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　(1)通過(guò)在人乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro，并在熒光的顯微鏡下仔細(xì)觀察綠色的熒光蛋白的分布以及表達(dá)情況。

2、
　　(2)采用 Western blot法測(cè)定ZIC1轉(zhuǎn)染、空載的M DA-MB-231細(xì)胞中ZIC1蛋白的表達(dá)情況。
　　(3)通過(guò)MTT法檢驗(yàn)不同濃度姜黃素對(duì)M DA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的增殖能力的影響，篩選出最接近50％抑制率的有效濃度作為以下試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)加藥濃度，結(jié)合細(xì)胞ZIC1轉(zhuǎn)染及空載，構(gòu)建成空載不加姜黃素組（對(duì)照組），空載加姜黃素組、轉(zhuǎn)染不加姜黃素組及轉(zhuǎn)染加姜黃素組（實(shí)驗(yàn)組）。
　　(4)采用MTT法

3、檢測(cè)ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-M B-231的細(xì)胞黏附能力的影響。
　　(5)采用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-M B-231的細(xì)胞遷移能力的影響。
　　(6)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)ZIC1、姜黃素及ZIC1聯(lián)合姜黃素對(duì)人乳腺癌細(xì)胞MDA-M B-231的細(xì)胞凋亡的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)通過(guò)在人乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢

4、病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro48小時(shí)后，可以測(cè)定到綠色的熒光蛋白，轉(zhuǎn)染率達(dá)90%。
　　(2) Western blot法結(jié)果能夠顯示，ZIC1蛋白在穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的MDA-M B-231乳腺癌細(xì)胞中均有表達(dá)，而在空載細(xì)胞中均無(wú)表達(dá)。
　　(3) MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示，5個(gè)濃度梯度的姜黃素(1,2.5,5,10,20mg/L)對(duì)ZIC1空載組和轉(zhuǎn)染組人乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231的抑制作用呈現(xiàn)藥物濃度的依賴性，同

5、時(shí)發(fā)現(xiàn)濃度為5mg/L的姜黃素對(duì)其作用48h后抑制率在50%左右。因此，5mg/L濃度的姜黃素，作為下面實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)加藥濃度。
　　(4) MTT法檢測(cè)結(jié)果能夠顯示，與對(duì)照組進(jìn)行比較，轉(zhuǎn)染ZIC1基因，或是加入5m g/L姜黃素，能夠明顯抑制M DA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的黏附率，且轉(zhuǎn)染ZIC1聯(lián)合姜黃素對(duì)細(xì)胞的黏附能力的抑制最明顯。
　　(5)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果能夠顯示，與對(duì)照組進(jìn)行比較，ZIC1基因、姜黃素以及兩者聯(lián)合均能

6、抑制M DA-MB-231乳腺癌細(xì)胞的遷移，存在著時(shí)間依賴性，并且兩者聯(lián)合效果更明顯。
　　(6)流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定結(jié)果能夠顯示，三組實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞的凋亡率明顯高于對(duì)照組，三組實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組分別進(jìn)行比較，存在統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義（P<0.05）；其中轉(zhuǎn)染加姜黃素組凋亡率最高（P<0.05），為（15.17±1.17）%；空載加姜黃素組凋亡率（7.34±1.33）%高于轉(zhuǎn)染不加姜黃素組（5.41±1.43）%；而對(duì)照組細(xì)胞的凋亡率僅是（2.49±

7、0.83）%。
　　結(jié)論：
　　(1)通過(guò)在人乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231中穩(wěn)定轉(zhuǎn)染慢病毒載體pLV-Zic1-PGK-Puro，乳腺癌M DA-MB-231細(xì)胞中ZIC1基因的表達(dá)明顯增強(qiáng)；
　　(2)濃度為5mg/L的姜黃素對(duì)轉(zhuǎn)染組及空載組乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-231作用48h后抑制率在50%左右；
　　(3) ZIC1基因的表達(dá)上調(diào)，或是加入5mg/L姜黃素，可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞M DA-MB-23