UGPase和反義4CL基因在煙草中的轉(zhuǎn)化及表達研究.pdf

1、本論文研究了來源于紫穗槐的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UGPase)基因和4-香豆酸：CoA連接酶(4CL)基因?qū)D(zhuǎn)基因煙草中纖維素及木質(zhì)素合成的影響，從而為利用基因工程手段培育低木質(zhì)素含量、高纖維素含量的植物新品種，解決造紙制漿過程中因降解木質(zhì)素造成的環(huán)境污染問題提供理論指導及技術(shù)支持。 論文首先應(yīng)用PCR及酶切方法，將從紫穗槐中克隆的UGPase及反義4CL基因連接到質(zhì)粒pBI121上，構(gòu)建了單基因植物表達載體pBU、pBa

2、4CL及雙價基因植物表達載體pBU-a4CL，用凍融法將3個載體分別轉(zhuǎn)化進根癌農(nóng)桿菌LBA4404中。 在此基礎(chǔ)上，用根癌農(nóng)桿菌介導法進行了煙草轉(zhuǎn)化，獲得了大量抗性植株。PCR和Southern雜交檢測證實，UGPase和反義4CL單價及雙價基因己分別整合到煙草基因組中。轉(zhuǎn)基因植株的纖維素和木質(zhì)素含量測定結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)UGPase基因煙草的纖維素含量增加了2.4～6.3﹪，但木質(zhì)素含量沒有變化；轉(zhuǎn)反義4CL基因煙草的木質(zhì)素含量降低