幽門螺旋桿菌抗原和CTB融合基因在煙草、番茄中的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、本研究分別構(gòu)建了含融合基因CTB-cagA3.4、CTB-Linker-ureB和CTB-Linker-cagA1.8的植物表達(dá)載體，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤轉(zhuǎn)化法，將融合基因轉(zhuǎn)入煙草和番茄中，以期獲得同時表達(dá)HpCagA蛋白或UreB蛋白和粘膜佐劑CTB的轉(zhuǎn)基因植株，為研制防治人類Hp感染的有效和安全的功能性食品奠定基礎(chǔ)。同時優(yōu)化番茄的轉(zhuǎn)化體系，為建立以煙草和番茄作為生物反應(yīng)器來表達(dá)微生物抗原奠定了技術(shù)平臺?！　⊥ㄟ^兩年多的實驗，獲得了

2、以下結(jié)果：(1)構(gòu)建能在煙草和番茄基因組中高效表達(dá)的含外源融合基因的植物表達(dá)載體p13-CC1N、p23-35SCLUN、p23-35SCLCN和p121-CLUN，由CaMV35S啟動子啟動，PCR分析、酶切鑒定及DNA序列測定驗證結(jié)果正確后將質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌EHA105或GV3101中。(2)構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-CLU，轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL-21(DE3)中，ITPG誘導(dǎo)表達(dá)，以檢測融合蛋白的原核表達(dá)情況；(3)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的