Tat-Cry1A融合基因在模式植物中遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、目前害蟲對Bt的抗藥性問題已經(jīng)成為研究熱點，因此國內(nèi)外研究者都在積極尋找新的應對昆蟲抗藥性的途徑。人工合成的Tat肽具有能夠與其它大分子的蛋白組成融合蛋白穿透細胞膜進入細胞內(nèi)的特性，國內(nèi)已經(jīng)有研究者首次將Tat肽引入農(nóng)業(yè)害蟲防治領域，在原核中對CrylAc殺蟲基因的增效作用已經(jīng)得到驗證，對抗性小菜蛾種群的的增效倍數(shù)達到9.69倍。因此將利用遺傳重組方法構(gòu)建的Bt殺蟲基因與Tat基因的融合基因轉(zhuǎn)入模式植物，明確Tat蛋白在植物體系中的表達

2、對Bt殺蟲基因的增效作用，從而開辟Tat應用的新領域和克服害蟲抗藥性的新途徑。 本課題將Tat肽應用到植物轉(zhuǎn)基因工程中，驗證Tat肽在植物體系中對CrylA殺蟲基因的增效功能。通過PCR擴增從轉(zhuǎn)雙價基因抗蟲棉中的DNA基因組中克隆到了包含啟動子、增強子、poly A序列、終止子等一系列調(diào)控元件的完整的CrylA殺蟲基因的表達盒，優(yōu)化Tat基因的表達密碼子，設計并合成了Tat基因序列，為了檢測融合基因在模式植物中的表達，將黃色熒光

3、蛋白YFP作為標記基因利用遺傳重組的方法構(gòu)建了一個攜帶Tat和YFP基因的完整的CrylA殺蟲基因的表達盒。同時為了研究各目的基因之間的相互影響和Tat的功能，分別構(gòu)建pBI121-CrylA、pBI121-Fat-CrylA、pBI121-Tat-CrylA-YFP、pBI121-Tat-CrylA和pBI121-CrylA-YFP(對照)四種植物表達載體，.將其導入根癌農(nóng)桿菌GV3101中，同時建立了完整的模式植物轉(zhuǎn)化體系，分別利用