酶解豬血紅蛋白制備降血壓肽的工藝參數(shù)優(yōu)化及體外降血壓活性研究.pdf

1、豬血紅蛋白經(jīng)蛋白酶水解產(chǎn)生的具有降血壓活性的多肽屬于食源性生物活性肽，安全性高，研究報道其在降壓功能方面具有較突出的表現(xiàn)，有望作為一種天然的降壓組分獲得廣泛應(yīng)用。
　　 本研究以血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensin I-Converting Enzyme，ACE)抑制率為指標(biāo)，比較了不同蛋白酶水解豬血紅蛋白得到的酶解產(chǎn)物的降血壓活性（即ACE抑制活性），并根據(jù)酶解產(chǎn)物的降血壓活性篩選一種最適水解用酶。以豬血紅蛋白為底物，選用

2、胰蛋白酶、胃蛋白酶和木瓜蛋白酶作為水解用酶，測定三種蛋白酶在各自適宜酶解條件下酶解豬血紅蛋白產(chǎn)物的降血壓活性及其水解度。研究結(jié)果表明，通過實驗得到三種酶酶解6小時后，不同蛋白酶水解度由大到小依次為木瓜蛋白酶＞胃蛋白酶＞胰蛋白酶，而ACE抑制率為胃蛋白酶＞胰蛋白酶＞木瓜蛋白酶。篩選出胰蛋白酶作為水解用酶來制備具有較高降血壓活性的豬血紅蛋白酶解產(chǎn)物。
　　 以胰蛋白酶作為水解用酶，采用底物濃度、水解溫度、pH值、酶用量及水解時間等單

3、因素實驗對豬血紅蛋白進(jìn)行酶解，評價每個因素下的最佳酶解水平范圍，并通過設(shè)計正交時間對酶解工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，以獲得具有較高降血壓活性的酶解產(chǎn)物。研究結(jié)果表明，胰蛋白酶最佳酶解條件為底物濃度10％，水解溫度40℃，pH值9.0，水解時間6h以及酶用量2000U/g，此時產(chǎn)物ACE抑制率為62.54％。
　　 以胰蛋白酶作為水解用酶，采用優(yōu)化得到最佳酶解條件對豬血紅蛋白酶解，將制備的酶解產(chǎn)物進(jìn)行超濾分離，以考察不同分子量范圍的酶解產(chǎn)物

4、的降血壓活性。研究結(jié)果表明各組分ACE抑制活性大小順序為：Lc(分子量＜5KDa》＞Oc（酶解原液）＞Mc(10KDa＞分子量＞5KDa)＞Hc(分子量大于10KDa)，ACE抑制活性最強的組分為分子量小于5KDa的組分。
　　 將分子量小于5KDa的組分配制為4、8、12、16、20、24、28μg/mL7種濃度的溶液，卡普托利配制為0.4、0.8、1.2、1.6、2.0、2.4.、2.8ng/mL7種濃度的溶液，并分別測定樣

5、品ACE抑制率。結(jié)果表明豬血紅蛋白酶解產(chǎn)物分子量小于5KDa的組分的ACE抑制率活性IC50為13.69μg/mL，具有較強的體外降血壓活性。對照樣品IC50為符合報道中卡普托利IC50值，說明本實驗酶解產(chǎn)物ACE抑制活性研究具有可行性，并且說明本實驗測定樣品ACE抑制率的方法具有科學(xué)性。
　　 配制胃蛋白酶、胃蛋白酶+胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶+胰凝乳蛋白酶+胰蛋白酶3種模擬胃腸道消化的環(huán)境，對未經(jīng)超濾和已經(jīng)超濾處理的兩個組分進(jìn)行

6、進(jìn)一步消化處理，考察酶解產(chǎn)物在消化酶的處理前后的變化，以其ACE抑制率作為評價指標(biāo)判斷其胃腸道消化穩(wěn)定性。結(jié)果表明：分子量小于5KDa的組分在處理前后的ACE抑制率變化不明顯。而酶解原液的豬血多肽在通過處理后，其ACE抑制活性都明顯地降低。根據(jù)該結(jié)果評定出經(jīng)胰蛋白酶酶解豬血紅蛋白制備的降血壓肽中分子量小于5KDa的組分具有高胃腸消化穩(wěn)定性。
　　 本實驗對豬血多肽作為降血壓活性產(chǎn)品用于工業(yè)化生產(chǎn)奠定了實驗基礎(chǔ)，為今后開發(fā)豬血降血