紫菜降血壓肽的酶法制備及降壓效果的研究.pdf

1、本文通過分析比較5種大型海藻的蛋白含量、氨基酸組成等因素確定了壇紫菜作為研究和制備海藻降血壓肽的原料；經(jīng)酶法、超濾、凝膠層析、反相高效液相色譜、質(zhì)譜等技術(shù)研究了提取海藻降血壓肽的工藝條件和技術(shù)方法，獲得具有較高血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制活性的海藻降血壓肽。并通過動物實驗進(jìn)一步證實了所制備的紫菜降血壓肽具有顯著的降壓效果。 首先，通過對福建沿海5種大型海藻主要成分的分析，發(fā)現(xiàn)海藻中均含有豐富蛋白質(zhì)、多糖和礦物質(zhì)等營養(yǎng)成分，而蛋

2、白質(zhì)含量以壇紫菜為最高，約占干重的28.78％，且氨基酸組成中含有較多適合降血壓肽結(jié)構(gòu)模型的氨基酸，確定壇紫菜具有制備降血壓肽的合適蛋白源，是制備海藻降血壓肽的最佳原料。 體外檢測降血壓肽ACE抑制活性的實驗中需要大量的ACE，本實驗通過硫酸銨分級鹽析法提取豬肺組織中的 ACE粗酶液，測定其酶活力為15.45×10-3U/mg，比活力為33.80×10-3 U/mg，且活性較為穩(wěn)定，可用于降血壓肽關(guān)于ACE抑制率的檢測。

3、 本研究中通過比較分析AS.1398中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、復(fù)合蛋白酶、堿性蛋白酶、風(fēng)味蛋白酶等6種蛋白酶對紫菜的酶解效果，篩選出AS.1398中性蛋白酶為制備紫菜降血壓肽的最佳蛋白酶；經(jīng)正交實驗獲得其最佳酶解條件為溫度50℃、酶濃度12000 U/g、底物濃度5％、pH7.5、酶解時間10 h。在該條件下獲得的紫菜酶解產(chǎn)物的水解度為75.96％，ACE抑制率達(dá)78.34％。 采用超濾、Sephadex G-15凝膠層

4、析和RP-HPLC等分離技術(shù)對紫菜酶解液進(jìn)行分離純化，獲得成分較為單一的降血壓肽組分Ⅲ-E-6，其對ACE的抑制率達(dá)到89.54％。經(jīng)過MALDI-TOF/MS分析，推測組分Ⅲ-E-6中降血壓肽的分子量為860.17。 動物實驗中，通過急性毒性實驗證實紫菜降血壓肽屬于無毒物質(zhì)。以原發(fā)性高血壓大鼠(SHR)和正常對照京都 wistar大鼠(WKY)為模型動物。一次性給藥實驗結(jié)果顯示，紫菜降血壓肽500 mg/kg組、1000 mg

5、/kg組、1500 mg/kg組和Captopfil組的SHR在給藥后，血壓分別下降了18.7 mmHg、31.5 mmHg、45.2mmHg和58.5 mmHg；長期性給藥實驗結(jié)果顯示，在給藥4周后，SHR的血壓分別下降了21.2 mmHg、28.0 mmHg、37.0 mmHg和47.0 mmHg，表明隨著劑量的增加，血壓降低的效果越顯著。在與WKY的對照實驗中發(fā)現(xiàn)，紫菜降血壓肽對WKY的正常血壓沒有顯著影響，而Captopril對