動態(tài)高壓微射流技術對脂肪酶活性與構象的影響.pdf

1、脂肪酶因其廣泛的應用而越來越受關注,其活性和穩(wěn)定性的變化也是研究的熱點。而動態(tài)高壓微射流技術作為一種處理方法應用于脂肪酶還鮮少研究。本課題通過測定酶活、圓二色譜、紫外吸收光譜和巰基總量來研究動態(tài)高壓微射流技術對脂肪酶活性和構象的影響,并協(xié)同研究加入聚合物PEG和有機溶劑異丙醇化學修飾對脂肪酶的影響,探討脂肪酶活性與構象之間存在的關聯(lián)性。并首次嘗試將DHPM處理應用于酶非水相催化之中。
　　 以CRL為原料,研究DHPM處理對其活

2、性及構象的影響。發(fā)現:DHPM50MPa和100MPa處理對CRL相對活性沒有顯著影響,150MPa和200MPa處理下CRL活性升高,最高增加11.33％左右。而隨著貯存時間的增加相對活性先升高后降低,在貯存1h后,活性達到最高。經過8h后,處理酶均處于鈍化狀態(tài)。DHPM處理對CRL二級結構有影響。β-折疊的含量變化趨勢與CRL的相對酶活的變化趨勢相似,兩者變化呈一定的正相關,而α-螺旋的變化呈現非線性變化。DHPM處理使CRL的酶結

3、構部分舒展,三維結構發(fā)生了變化。
　　 通過DHPM協(xié)同化學修飾處理CRL,研究其活性和構象的變化。在CRL緩沖體系中加入聚乙二醇,再經DHPM處理。結果顯示:在PEG80004％(w／v)時,CRL的相對活性達到105.1％。DHPM處理加入4％(w／v)PEG8000的CRL后,發(fā)現其相對活性降低,而隨著貯存時間的增長,CRL的酶活均有所提高。對CRL而言最佳中間態(tài)是100MPa處理下反應6h(激活43.73％)。聚合物PE

4、G對CRL Tm值影響不顯著,而PEG的加入導致紫外吸收強度發(fā)生變化。在CRL,緩沖體系中加入有機溶劑異丙醇,再經DHPM處理。結果顯示:異丙醇在20％(v／v)左右的時候,CRL的相對活性最高。隨著DHPM處理壓力從100MPa增加到200MPa,CRL的活性逐漸增加。200MPa下處理2次,酶活增加將近20％。而這兩種體系中,CRLβ-折疊含量與酶活變化仍存在一定的正相關性。
　　 因脂肪酶在非水相催化中的廣泛應用,所以提高

5、脂肪酶在非水相中的活性,溶解性和穩(wěn)定性就顯得至關重要。DHPM處理正己烷體系中的CRL,結果表明:CRL對油酸和月桂醇的催化合成率較高。DHPM處理后,CRL的相對酯化活性發(fā)生改變。隨著處理壓力的增加,相對酯化活性先升高后降低,在150MPa下達到最大為103.7％。經DHPM處理后的CRL,在正己烷中的溶解性均增加,在150MPa下,其相對溶解性增加最大,約為16.4％。經DHPM處理后的CRL在正己烷中的穩(wěn)定性有所差異；雖然DHPM