靶向納米粒的制備及GPC3在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)特征.pdf

1、全球因肝癌致死率僅次于肺癌和胃癌，居惡性腫瘤致死率的第3位[1]。此外，肝癌的隱匿性起病、高惡性程度、高死亡率等特點(diǎn)，導(dǎo)致絕大多數(shù)患者確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)治療最佳時(shí)機(jī)。即使將腫瘤切除或進(jìn)行化學(xué)療法，都無(wú)法獲得有效的治療效果。因此，探索新的治療途徑顯得尤為重要。腫瘤靶向治療因能夠特異、高效殺傷腫瘤細(xì)胞，是目前治療腫瘤的希望之星。目前靶向結(jié)合技術(shù)主要是將基因、抗體或多肽等與載體相連，通過(guò)表面攜帶的特異性媒介，使其能靶向的到達(dá)目的組

2、織或器官，并與相應(yīng)的抗原或受體結(jié)合，其中，以納米顆粒作為載體的腫瘤靶向治療已成為研究熱點(diǎn)[2-4]。
　　近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外許多研究[5-6]表明，GPC3作為細(xì)胞表面糖蛋白，在正常肝組織和肝炎患者中不表達(dá)而在HCC中特異性高表達(dá)。由于GPC3單抗對(duì)肝癌的免疫治療正在進(jìn)行不同的臨床階段[7-10]，充分說(shuō)明其對(duì)細(xì)胞表面的GPC3蛋白具有較好的親和力和特異性結(jié)合作用，故可用GPC3單抗介導(dǎo)抗腫瘤藥物以設(shè)計(jì)靶向性的抗腫瘤系統(tǒng)。因此，本論文

3、正是利用載體偶聯(lián)和抗原抗體的免疫學(xué)反應(yīng)，將與納米顆粒偶聯(lián)的GPC3抗體作用于肝癌細(xì)胞系HepG2和正常肝細(xì)胞L02，與HepG2表面的GPC3蛋白結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了抗體與肝癌細(xì)胞的靶向結(jié)合，為進(jìn)一步靶向研究提供支持。
　　目的：研究證明GPC3在肝癌細(xì)胞和正常肝細(xì)胞中的表達(dá)差異，并研究GPC3在肝癌細(xì)胞中的分布特征，為靶向治療機(jī)制研究奠定理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)技術(shù)支持。
　　方法：采用EDC作為中間連接體，利用交聯(lián)劑碳二亞胺(EDC)可在

4、范德華力用作距離之內(nèi)的-COOH與-NH2之間形成交聯(lián)鍵的特點(diǎn)，誘導(dǎo)載藥二氧化硅納米粒與GPC3單克隆抗體偶聯(lián)，制備GPC3 antibody-SiO2免疫交聯(lián)物。采用圓二色譜儀對(duì)其表征。HepG2細(xì)胞和LO2細(xì)胞分別與培養(yǎng)液、SiO2、GPC3 antibody、GPC3 antibody-SiO2，培養(yǎng)一定時(shí)間后，利用免疫熒光法檢測(cè)GPC3在不同細(xì)胞中的分布情況。
　　結(jié)果：制備GPC3 antibody-SiO2復(fù)合物，利用

5、圓二色譜儀表征，其抗體變化微弱，進(jìn)一步證實(shí)了GPC3單克隆抗體交聯(lián)到二氧化硅納米粒上。SiO2、GPC3antibody、GPC3 antibody-SiO2，空白對(duì)照組分別與HepG2細(xì)和LO2細(xì)胞培養(yǎng)，免疫熒光實(shí)驗(yàn)證明在HepG2細(xì)胞中加有GPC3抗體和GPC3 antibody-SiO2組呈陽(yáng)性，而L02細(xì)胞四組均呈陰性，僅細(xì)胞核染上DAPi。
　　結(jié)論：GPC3 antibody-SiO2復(fù)合物制備成功;免疫熒光檢測(cè)表明G